Molecular Probes公司亲脂性探针:神经细胞逆行性和顺行性示踪
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【嘉美生物】长链的亲脂性二烷基碳菁类染料(Dialkylcarbocyanines),尤其是DiI 和二烷基-氨基苯乙烯基染料,包括DiA 及其类似物,已广泛用于活体和固定组织及细胞的神经元逆行性和顺行性示踪。DiI 标记对细胞活性、发育或其它基本的生理特性无明显影响。有报道,运动神经元用DiI 标记后,在细胞培养体系中可存活4 个星期,而在体内存活长达1 年之久[1]。这些染料通过在细胞浆膜内的侧向扩散对神经元进行均一性标记,在固定样本中的标记速度为0.2-0.6 毫米/天,而在活体组织中因细胞膜对染料的主动运输作用,使得标记速度更快,达6 毫米/天。在醛类固定的组织中,DiI 的扩散有时可持续两年[2,3]。总之,这些染料不会从标记细胞扩散到非标记细胞,避免了交叉染色。然而,由切片导致的细胞膜破损可能会引起染料的非特异性扩散。
嘉美公司代理的Molecular Probes (分子探针)公司提供多种具有不同光谱特征和细胞标记特性的二烷基碳菁类染料。这些产品可用于荧光显微镜技术,Confocal(激光共聚焦技术) 及流式细胞术。
1、产品特点:
l DiI (产品编号:D282, D3911, N22880)和DiO (产品编号:D275, N22881)的荧光最大激发与发射波长相差65 nm (如图1),因此两者可组合进行双色标记[4,5,6]。DiO 的染色强度通常弱于DiI,在固定的组织中有时会完全阴性[7,8]。
l FAST DiITM (产品编号:D3899, D7756) 和FAST DiOTM (产品编号:D3898)为DiI 和DiO 的衍生物,18 个碳原子中△9 和△12 位被双不饱和键所取代,因而增加了在细胞膜内的扩散速度[9]。
l CellTracker® CM-DiI (产品编号:C7000, C7001,N22883)为DiI 的衍生物,在DiI 中加入了具有中度巯基反应特性的氯甲基取代物,后者能与细胞内含巯基的肽和蛋白结合,使得CM-DiI 能够抵抗醛类的固定作用。CM-DiI 在细胞固定、破膜及石蜡包埋的整个过程中均能很好的保留在细胞内,因此较DiI 更适于固定后标本的长期示踪[10,11]。
l DiA (产品编号:D3883) 为亲脂性氨基苯乙烯基染料,常用于神经元的示踪[12,13]。DiA 可与DiI 双色标记神经细胞[7,14,15]。在固定的组织中,当DiO 染色失败时使用DiA 可能会获得良好的标记效果[7]。
l FAST DiATM (产品编号:D7758)为DiA 的衍生物,18个碳原子中△9 和△12 位被双不饱和键所取代,因而增加了在细胞膜内的扩散速度。
l DiD (产品编号:D307, D7757, N22882) 是DiI 的类似物,其荧光激发和发射波长明显红移(如图1),该特性有利于避免自发荧光和光毒性作用[16],且使该染料适合双色标记[17,18]。DiR (产品编号:D12731) 的荧光最大激发与发射波长处于近红外区,许多组织在此区光学表现为透明。
2、波谱及滤光片选择:
3、产品信息:
产品订购及咨询,请联系嘉美生物。