病毒包装

腺病毒（adenovirus，AV）是一种没有包膜的线状双链DNA，它能感染分裂细胞和非分裂细胞，在核内以神经元细胞的形式复制，存在多种AV血清型。到目前为止，构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方法取代E1或E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制，因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力（尤其是在体外），由于具有宿主范围广，对人致病性低；在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因；能有效进行增殖，滴度高；与人类基因同源；不整合到染色体中，无插入致突变性。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送miRNA/shRNA的方式是非常有效的选择。

慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载体发展起来，最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。
1、腺病毒表达
腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中高效瞬时过表达的可靠的基因递送平台。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。
（1）服务流程
1)构建含有外源基因的腺病毒表达克隆，采用PacI消化纯化质粒使ITRs裸露出来。
2)将腺病毒表达克隆转染293A细胞。收获细胞以制备病毒粗提液。
3)将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。确定病毒滴度。
4)将病毒上清加入靶细胞中
5)分析重组目的蛋白的表达
（2）您需要提供
1）含有目标基因的质粒（提供测序图谱）或所要表达的目的基因的名称，序列；
2）所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化
3）若需要检测外源基因的表达，如需要请提供相应的抗体
（3）我们提供
提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的腺病毒储存液，重组后的腺病毒载体质粒
（4）质量保证
如无特殊要求我们将提供至少1ml含108-109病毒的未纯化的病毒液

2、慢病毒表达
慢病毒系统是理想的可以在多种细胞类型（如原代细胞、干细胞和非分裂细胞）中实现可重复的稳定表达的基因表达工具。对于难转染的细胞而言，采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。慢病毒通过顺式作用元件将病毒运送到细胞核，并将要表达的基因序列整合到细胞的基因组中。采用慢病毒可以得到持续稳定的高表达。我公司采用慢病毒系统进行高滴度的复制缺陷型慢病毒颗粒的生产，从而可以有效转导几乎所有分裂和非分裂细胞类型。
（1）服务流程
1)含目的基因的慢病毒载体的构建和纯化提取；
2)慢病毒表达载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞；
3)培养48~72h，收集培养上清；
4)病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）；
5)滴度测定、目的基因检定
6)将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达。
（2）您需要提供
1）含有目标基因的质粒（提供测序图谱）或所要表达的目的基因的名称，序列；
2）所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化
3）若需要检测外源基因的表达，如需要请提供相应的抗体
（3）我们提供
提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液
（4）质量保证
如无特殊要求我们将提供至少1ml含108-109病毒的未纯化的病毒液