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慢病毒转染肿瘤类器官建立稳定转染株服务
人源肿瘤类器官在组织病理学、生物标志物与遗传特征、药理功能水平上保留了大部分原代肿瘤的特征、具有较好的临床相关性。
服务类别:分子与细胞总访问:151
最后更新:2023-10-24半年访问:16
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人源肿瘤类器官(Patient-derived organoids, PDO)在组织病理学、生物标志物与遗传特征、药理功能水平上保留了大部分原代肿瘤的特征、具有较好的临床相关性(Clinical relevance)。慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因导入工具,是体内外实验研究中最常用的载体之一,可高效将外源性基因整合到宿主染色体中并介导目的序列稳定表达,目前被广泛应用到快速高效研究基因功能、筛选特异性药物靶点,构建特定基因表达降低的动物等。

图1: 慢病毒包装转染原理

图2: 慢病毒转染类器官实验流程

慢病毒稳转类器官优势
  1. 二维组织培养模型缺乏真实的复杂性,并且往往不能反映人类肿瘤生物学特征;
  2. 类器官培养保持细胞增殖和形态,具有与原肿瘤组织高度相似的生物学特征及遗传特性,更真实的模拟肿瘤微环境;
  3. 在此基础上研究特定靶基因,慢病稳转细胞系更接近疾病真实状况;
  4. 构建稳转靶基因肿瘤类器官后可在体外连续传代培养、冻存,便于开展科学研究。
真实实验数据
图3: realtime-PCR验证某基因在胰腺癌类器官稳定转染后RNA表达水平

             
             
图4: Westernblot验证某基因在胰腺癌类器官稳定转染后蛋白表达水平
 
                
               
          
图5: Westernblot验证利用CRISPR-cas9慢病毒转染后MYC基因敲除蛋白表达水平

[参考文献]

Y Maru, K Orihashi, Y Hippo, gastrointestinal physiology and diseases methods and protocols, 2016, Springer.

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