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外泌体蛋白质组学服务
上海逍鹏生物提供外泌体蛋白质组学服务,无需昂贵的同位素标记试剂,实验周期短;可用于不同物种间的“有无差异蛋白”比较;克服标记定量技术在样本数量的上限制,灵活方便。
服务类别:分子与细胞总访问:303
最后更新:2024-6-4半年访问:6
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  • 服务介绍
  • 公司简介
 TMT标记定量蛋白组学

TMT (Tandem mass tag)是由ThermoFisher Scientific公司研发的一种多肽体外等重同位素标记的相对与绝对定量技术,采用6、10及16种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,经高分辨质谱仪串联分析,可同时比较多达16种样品之间的蛋白质表达量,是定量蛋白质组学中经典的高通量筛选技术。

 实验流程
 数据分析
标准数据分析内容
蛋白质总鉴定数量分析 蛋定与定量结果统计、差异结果统计、火山图、聚类热图
差异蛋白质功能分析 亚细胞定位、结构域分析、GO功能分析、KEGG通路分析、PPT互作网络分析
质量控制分析 肽段离子质量偏差分布、肽段离子得分分布、蛋白质丰度比分布
 技术优势
同一批次标记的样本统一处理,减少样本处理及实验误差,实验平行性较高
同一批次标记定量稳定性高
通过分级方法可深度可大大增加蛋白鉴定深度
  DIA蛋白质组学
DIA(data-independent acquisition,数据非依赖性采集)技术是近年来发展起来的一种新的质谱技术,属于非标记蛋白质组学方法。采用数据非依赖性扫描模式:将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口,然后对每个窗口中的所有离子进行检测、碎裂,从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的信息。从而降低样本检测的缺失值,同时提高定量准确性和重复性,实现大样本队列中高稳定,高精准的蛋白质组定量分析。
与DDA技术相比,DIA技术的优势包括:
(1)采集所有的离子信息,实现更高的数据覆盖度;
(2)减少采集的随机性,实现极高的检测重现性、稳定性;
(3)采用碎片离子定量,定量精密度、准确性、线性范围大大提高。基于上述技术优势,DIA技术尤其适用于大规模样本的高度覆盖、稳定和可追溯地分析。
 实验流程
  数据分析
标准数据分析内容
鉴定结果统计与分析 样本蛋白质及肽段鉴定柱状图、PCA分布图、定量差异统计分析
生物信息学分析 GO及GO富集、KEGG及KEGG富集分析、PPI互作网络与module分析
差异上下调蛋白KEGG蝴蝶图、KEGG通路功能归属等
 技术优势
全扫描模式:数据非依赖性采集模式,大大减少高丰度干扰,全面采集高低丰度信号,数据覆盖度提高近40%
超高重现性、稳定性:大样本鉴定重复率提升近40%,定量精密度提升近1倍
超高定量准确度:定量能力接近金标准SRM/MRM靶向技术
 Label free 蛋白质组
Label free是一种不依赖于同位素标记的非标记蛋白组定量技术,通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内标,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。
 实验流程
  数据分析
标准数据分析内容
蛋白质总鉴定数量分析 蛋定与定量结果统计、差异结果统计、火山图、聚类热图
差异蛋白质功能分析 亚细胞定位、结构域分析、GO功能分析、KEGG通路分析、PPT互作网络分析
质量控制分析 肽段离子质量偏差分布、肽段离子得分分布、蛋白质丰度比分布
 技术优势
无需昂贵的同位素标记试剂,实验周期短
可用于不同物种间的“有无差异蛋白”比较
克服标记定量技术在样本数量的上限制,灵活方便
TMT、Label Free、DIA如何选择

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