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蛋白提取 按照核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒说明书操作步骤提取核蛋白。 蛋白浓度定量 使用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定样品蛋白浓度。 制胶  （1mm胶，大约5分钟胶会凝） 试剂 浓度6.5％ H2O   ml 6.8 5*TBE   ml 1 40％丙烯酰胺（37.5：1）ml 1.65 50%甘油  ul 500 10％AP   ul 100 TEMED  ul 10 总体积 ml 10 待胶完全凝固后100v预电泳1h，缓冲液用预冷的0.5×TBE。 蛋白与探针反应 试剂名称 体积 10×binding buffer 2ul 1ug/ul poly（dl.dc） 1ul 50％glycerol 1ul 1%NP-40 1ul 100m M Mgcl2 1ul 核蛋白（unit） 阴性对照反应：0 阳性对照反应：1 冷探针竞争反应：1 常规反应：1 DNA(pmol/ul) 阴性对照反应：0 ul 阳性对照反应：0 ul 冷探针竞争反应：1 ul 常规反应：0 ul BIO-DNA(fmol/ul) 阴性对照反应：1 ul 阳性对照反应：1 ul 冷探针竞争反应：1 ul 常规反应：1 ul 总体积 ddH2O 补足至20ul 混合后室温放置20分钟或以上。 上样 预电泳完后更换预冷的电泳缓冲液，加5ul的5×上样缓冲液到样品混合液中，马上上样电泳。150v 30－45分钟。 电转移 将带正电的尼龙膜放入0.5×TBE中平衡10分钟。待电泳完成后将加有样品的整块胶取下电转。转膜缓冲液为预冷的0.5×TBE。380m A 30分钟。 交联 转膜完成后将膜取出，放在一张干净的滤纸上，做好标记。于紫外交联仪下交联10min。 封闭 用封闭液封闭15分钟。期间放于摇床上轻柔摇晃。 抗体反应 倒掉封闭液。用封闭液将抗体稀释300倍后，与膜完全作用15分钟。期间放于摇床轻柔摇晃。 洗脱        用1×的洗脱液清洗5分钟4次。 平衡 用平衡液平衡5分钟。 ECL发光检测。 1） 滴加新鲜配制的ECL混合溶液到膜的蛋白面侧，暗室中曝光。 2） 根据不同的光强度调整曝光条件，显影、定影。  结果分析 将胶片进行扫描存档，AlphaEaseFC软件处理系统分析目标带的光密度值。

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