质粒载体网NCI-N87[N87]人胃癌细胞

细胞名称NCI-N87[N87]（人胃癌细胞）

种属人

年龄（性别）男

组织来源胃癌

生长特性贴壁

细胞形态上皮细胞样

背景描述NCI-N87细胞表达表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG72，并且没有左旋多巴胺脱羧酶(DDC)活性。NCI-N87细胞的血管活性的肠肽(VIP)受体活性极低并缺乏胃泌激素受体，它们表达蕈毒碱胆碱受体。没有证据表明，NCI-N87细胞存在N-myc、L-myc、myb和EGF受体基因的重组。NCI-N87细胞表达的c-myc和c-erb-B2 RNA水平与其它细胞株相当。以下基因NCI-N87细胞不表达：N-myc、L-myc、c-cis、IGF-2或胃泌激素释放肽。据报道，NCI-N87细胞的植板率为4.3%。

生长培养基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

NCI-N87[N87]人胃癌细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备基础培养基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙，酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）NCI-N87[N87]人胃癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

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