酵母双（单）杂交cDNA文库构建

1. 服务流程

1.1 客户样品QC

1.2 Total RNA的提取。

1.3 mRNA的分离。

1.4 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。

1.5 对合成的cDNA双链进行分级纯化。

1.6 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。

1.7 将重组产物转化DH10B感受态细胞。

1.8 cDNA文库的QC。

a) 检测文库库容量。

b)随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。

1.9 初级文库铺板,抽提质粒

1.10 初级文库质粒与PDEST22(或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定

载体,根据客户需求确定载体)载体进行重组反应,电转化,检测文库质量。

a) 检测文库库容量。

b)每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。

2.送样要求

2.1 针对每个文库,客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本,或者至少500ug总RNA。

3.发货内容

3.1 我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),扩增后初级文库甘油菌,初级

文库中抽质粒,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告,酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。

4.质量标准

4.1 文库库容量:大于1*10^7 CFU。

4.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。

4.3 阳性率:大于95%。

5.服务时间

30个工作日内

 

MDL专业从事CRO,10余年的从业经历积累了丰富的经验。可以提供课题可行性评估、课题设计、实验执行、数据分析等全程科研服务实验服务涵盖动物模型、分子生物、免疫学蛋白学、细胞生物学、病理毒理、快速检测等