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Pull down实验
根据研究对象的不同,可以分为:DNA pull down、RNA pull down、GST pull down。
服务类别:分子与细胞总访问:626
最后更新:2024-12-27半年访问:25
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DNA pull-down体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做Western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如:转录因子、组蛋白等)。
RNA pull down体外研究RNA与蛋白互作的重要技术。该技术是用生物素标记体外转录的靶RNA分子,再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体,洗脱得到RNA结合蛋白质。再通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合;或通过质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。
GST pull-down技术是一种体外验证或筛选互作蛋白的技术。该技术将"诱饵"蛋白与一种易于纯化的配体标签(如:GST标签)进行融合表达,而带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获,形成"次级亲和支持物",用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。纯化产物洗脱后,经Western blot验证或LC-MS/MS,即鉴定与诱饵蛋白互作的蛋白。
GST pull-down
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