DNA pull-down是
体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将
生物素标记的DNA片段结合在
链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,
纯化出与DNA片段互作的蛋白,
洗涤洗脱得到的
蛋白产物,做
Western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做
质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如:转录因子、组蛋白等)。
RNA pull down是
体外研究RNA与蛋白互作的重要技术。该技术是用
生物素标记体外转录的靶RNA分子,再用
链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体,洗脱得到
RNA结合蛋白质。再通过
western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合;或通过
质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。
GST pull-down技术是一种体外验证或筛选互作蛋白的技术。该技术将"诱饵"蛋白与一种易于纯化的配体标签(如:GST标签)进行融合表达,而带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获,形成"次级亲和支持物",用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。纯化产物洗脱后,经Western blot验证或LC-MS/MS,即鉴定与诱饵蛋白互作的蛋白。
GST pull-down。bio-equip.com
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