小鼠单核巨噬细胞白血病细胞的处理方法与培养步骤！

                               小鼠单核巨噬细胞白血病细胞的处理方法与培养步骤！

此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

一、细胞简介
平台编号：bio-73131
拉丁属名：RAW 264.7
细胞名称：RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
种属：小鼠
年龄（性别）：雄；成年
组织来源：Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞
生长特性：贴壁
细胞形态：不规则形
背景描述：RAW 264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。RAW 264.7细胞不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。RAW 264.7细胞可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导RAW 264.7细胞分解红血球，但对肿瘤靶细胞无作用。
生长培养基：DMEM高糖(货号:PM150210)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件；气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
说明书下载：RAW 264.7.pdf

二、细胞特性
1）来源：鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞
2）含量：>1x106 个/mL
3）形态：不规则圆形，传代时密度要大，易分化
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

三、运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

四、细胞用途：仅供科研使用。

五、细胞接受后的处理：
1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。
4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
                     
六、细胞培养步骤

培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基；北美胎牛血清，10%；双抗1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、用细胞刮铲将细胞从培养瓶瓶壁上轻刮细胞使细胞脱落，将细胞悬液抽出到离心管内。
3、在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

下面T25瓶为例；
1、细胞冻存时，用细胞刮铲将细胞从培养瓶瓶壁上轻刮细胞使细胞脱落，将细胞悬液抽出到离心管内。可使用血球计数板计数。
2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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