人肾细胞腺癌细胞的培养方法与注意事项！

                                       人肾细胞腺癌细胞的培养方法与注意事项！
 

一、ACHN细胞概述
细胞名称：人肾细胞腺癌细胞
组织来源：肾转移灶：胸腔积液
细胞种属：人源
生长特性：贴壁
培养基：MEM
形态特征：上皮细胞
传代方法：每周2-3次更换新鲜培养基，1:2至1:3比例传代培养
培养条件：胎牛血清至最终浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃
细胞描述：源自22岁高加索男性，皮下接种至裸鼠体内21天100%发展成肿瘤
细胞冻存：液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）
细胞运输：干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）
 
二、ACHN细胞注意事项
复苏细胞接收后的处理：
1、收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2、75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3、建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
 
三、细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
 
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