western blot 是半定量研究蛋白质表达的基础实验,常应用于对生物体内信号通路、代谢途径的研究,对其中起到关键作用的蛋白进行研究,用于蛋白的定性和定量研究。
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western blot 是半定量研究蛋白质表达的基础实验,常应用于对生物体内信号通路、代谢途径的研究,对其中起到关键作用的蛋白进行研究,用于蛋白的定性和定量研究。
western blot 操作关键步骤
1.组织采集或细胞培养
2.样品制备
3.SDS-PAGE
4.转膜
5.一抗的孵育
6.二抗的孵育
7.显影
Western blot实验样品要求:
1.新鲜或正确保存的组织、细胞或蛋白样品。
2.组织样品:每份样品约250~500mg;
3.细胞样品:每份样品约1×106~1×107 细胞数;
4.蛋白样品:裂解样品总蛋白量>500μg/样品,浓度≥2μg/μl。
冷冻样品应保存于-80℃,最好使用干冰运输到达实验室。
Western blot实验报告呈现:
1.样品处理流程;
2.实验操作步骤;
3.原始WB图片;
4.软件Image J初步分析灰度值表;
5.如有需要提供柱状图