稳转细胞株构建

一、服务介绍

        稳转细胞株是指能够持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达的细胞株，适用于各种研究应用， 如重组蛋白和抗体生产、检测分析、基因编辑、基因和蛋白功能性研究等。

        构建稳转细胞株的基本原理是用脂质体转染质粒或慢病毒感染的方法将构建好的含外源目的基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行选择性筛选，得到传代过程中可稳定表达目的基因或者稳定沉默特定基因表达的细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素（puromycin）、新霉素（neomycin）和潮霉素（hygromycin）。

        目的基因的过表达或沉默往往是研究该基因/蛋白功能的常用手段。目的基因是否有效转染靶细胞是基因功能研究的前提条件之一，而稳转细胞株可以长时间表达外源目的基因，弥补了瞬时感染(或转染)实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察目的基因对细胞功能的影响及蛋白间相互作用。

        我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法，此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组，且整合位点处于转录相对活跃的区域，从而获得更加高效表达外源基因的稳转细胞株。

        慢病毒包装系统：慢病毒载体（ Lentiviral vector ）是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，有更广的宿主范围。我司使用的三质粒慢病毒包装系统包括：转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒。其中转移质粒中含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，以及 350 bp 的 gag 和 RRE，并在其中插入目的基因、筛选基因（如Puro）或标志基因 ( 如绿色荧光蛋白 GFP) ；包装质粒表达 HIV-1 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒 G 蛋白 (VSV-G)，增加了载体的稳定性。利用三质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。

二、项目内容

三、服务流程

客户前期准备

交付内容及说明

报价及周期

上海康稳生物科技有限公司是一家专注于生命科学和生物技术领域的企业，主要从事分子生物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学等实验研究的相关生化试剂、耗材，抗体及仪器的销售，致力于在各个领域内向用户提供世界领先水平和质量稳定的产品，同时也为客户提供相关的实验服务。