CRISPR/Cas9介导基因敲除细胞系建立

CRISPR/Cas9介导基因敲除细胞系建立
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是一种由RNA指导的Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术，其原理是通过crRNA（ CRISPR-derived RNA ）碱基配对与 tracrRNA （trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，并将Cas9 核酸酶带到基因组上的具体靶点，并在Cas9 蛋白介导与crRNA 配对靶位点序列进行特异性识别，从而对特定基因位点进行切割导致突变。
一、服务内容
1. sgRNA设计和高效sgRNA筛选；
2. sgRNA表达载体构建；
3. sgRNA和Cas9质粒共转染细胞和敲除细胞株筛选及鉴定。
二、收费标准

服务项目	内容说明	收费标准￥	实验周期
sgRNA设计和筛选	针对特异性基因设计多条sgRNA序列	5000	1周
高效sgRNA筛选载体构建	选择敲除效率最高的两条sgRNA构建表达载体	50000/基因	4-6周
基因敲除细胞系的建立 （提供1-2个敲除基因型细胞系和WT细胞系）	使用sgRNA和Cas9共转染细胞并对目的基因进行敲除	250000/基因/细胞系	3-5月

三、实验要求
1. 客户提供培养状态良好的目的细胞；
2. 客户提供待敲除基因信息，包括基因名称，NCBI号等；
三、终产品
1. 完整实验报告
2. sgRNA筛选结果（含sgRNA序列和PCR鉴定结果等）
3. 基因敲除细胞系（细胞数目>1*106）（含基因敲除鉴定结果）
 

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