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鬼笔环肽(phalloidin 鬼笔鹅膏素)
鬼笔环肽是从毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中得到的有毒环状七肽,它的作用与细胞松弛素B恰好相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。
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最后更新:2023-10-10半年访问:61
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鬼笔环肽(phalloidin 鬼笔鹅膏素)
——细胞骨架的染色神器
鬼笔环肽是从毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中得到的有毒环状七肽,它的作用与细胞松弛素B恰好相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。鬼笔环肽通过与聚合的微丝结合, 抑制了微丝的解体, 破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。用FITC和Rhodamin等荧光物质标记的鬼笔环肽可特异的与真核细胞的F-actin结合,从而显示微丝骨架在细胞中的分布。
warbio生物提供多款不同荧光基团标记的鬼笔环肽,可以满足您多标实验的不同需。
产品特点:
1)亲和力高:Kd= 20 nM;
2)特异性强:选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合;
2)优于抗体染色:鬼笔环肽无物种限制,且几乎不存在非特异性染色,染色区和非染色区域对比性极其明显;
4)灵敏度高:纳摩尔浓度(nM)染色即可满足实验要求;
5)兼容性好,肌动蛋白活力不受影响:鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Da,标记后的肌动蛋白许多生理特性都得以维持;
6)适用范围广:无物种差异性;同样适用于甲醛固定和打孔处理后的组织样本。
实验流程:



鬼笔环肽的配制:
0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇(也可用DMSO或无水乙醇溶解)配成贮存液,可在-20度避光的条件下长期保存,工作液的浓度为5ug/ml,由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。
染色程序:
生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟;3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟,夏季时间可以短一些,生理盐水PBS清洗细胞2次;DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油),盖上盖玻片,荧光或共聚焦显微镜下观察。
染色结果:


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