蛋白生物学技术服务-蛋白免疫沉淀

技术原理与实验步骤

蛋白免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一种研究蛋白质间交互作用的生物技术，这种技术是将蛋白质视为抗原，加入相对应的抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的agarose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，从而达到分离和浓缩出特定蛋白质的目的。

蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。

服务流程

• 客户提供血液、细胞、组织等样品
• 样品裂解，离心后收集上清
• 加入目的蛋白A抗体，孵育与目的蛋白A结合
• 加入连接有proteinA或G的琼脂糖凝胶珠，孵育与抗体结合
• 离心，弃掉上清，沉底进行SDS-PAGE验证
• 提交结果：抗体沉淀蛋白、蛋白SDS-PAGE及western blot验证图

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