基于iTRAQ的定量蛋白组分析

BTP-基于iTRAQ的定量蛋白组分析

iTRAQ (Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)即等重标签标记用于蛋白质相对和绝对定量技术。它是美国Applied Biosystems公司研发的蛋白质组定量专利技术。该技术可实现对多种不同样品中蛋白的比较，如用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。 来自不同样品的同一肽段经 iTRAQ 试剂标记后具有相同的质量数，并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后，在二级质谱检测(MS2)中，不同的报告基团被释放，它们各自的质谱峰的信号强弱，代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。

百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，推出基于iTRAQ的定量蛋白组分析服务技术包裹，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的蛋白寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括蛋白酶切、肽段标价、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

关于样品

1. 如果您提供的是组织样品，请您干冰将组织样品寄给我们；植物组织样本最少200mg，血液样品至少1ml(血浆注意用EDTA防凝)，血清0.2-0.5ml，尿液2ml，动物组织样品至少1g，细胞样品为1X107个细胞，酵母、微生物等干重200mg。

2. 如果您提供的是蛋白样品，请您保证蛋白总量在100ug以上；蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可。

3. 样品运输：请使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

一站式服务

您只需下单-寄送样品

百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

对于可以传代的细胞样品来说，我们可以采取SILAC的方法完成对于细胞蛋白质组的标记过程，但是许多其他研究体系，比如组织样品以及不能进行传代培养的细胞来说，需要其他的标记方法来完成定量蛋白组学分析。iTRAQ技术就是基于此实验需求建立起来的体外（in vitro）标记技术。

iTRAQ试剂包括三部分：

1. 报告基团（reporter group）：相对分子量为113-121Da（无120），因此iTRAQ试剂可同时标记8组样品。

2. 平衡基团（balance group）：相对分子量为192-184Da (无185)，使得八种iTRAQ试剂分子量均为305 Da，保证标记的同一肽段m/z相同。

3. 肽反应基团：能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接，从而标记上肽段 拿到蛋白样品之后，不同组的样品首先分别进行等量酶切，每一个酶切得到的肽段样品选择一种标记试剂进行标记反应（每一个肽段至少含有一个游离的氨基进行反应）；然后将经过不同标记的肽段样品混合后进行后续的质谱分析。

来自不同样品的同一肽段经iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数，并在一级质谱检测（MS1）中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后，在二级质谱检测（MS2）中，不同的报告基团被释放，它们各自的质谱峰的信号强弱，代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。

基于iTRAQ的定量蛋白组研究路线

中/英文项目报告

在最终的技术报告中，百泰会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：

1, 实验步骤（中英文）

2, 相关的质谱参数（中英文）

3, 鉴定物质的信息

4, 原始数据

5, 生物信息学分析