核酸提取与纯化

实验介绍

总RNA提取

分离纯净、完整的RNA分子对于分子克隆的实验非常重要，而且是进行基因表达分析的基础。在总RNA中，75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA)，其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA（small nuclear RNA，snRNA）及核仁小分子RNA（small nuceolar RNA，snoRNA）等组成。RNA提取与纯化技术是基因克隆、cDNA文库构建、蛋白质体外翻译、RNA序列分析及Northern Blot等技术所必需的，评价RNA质量的两个关键指标是其完整性和纯度。

miRNA提取

MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子，如小干扰RNAs (siRNAs)，通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达，以预防通过各种机制的表达。 他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。采用miRNA分离纯化试剂盒可以从新鲜或冷冻组织、细胞中进行高效提取。

基因组DNA提取

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究以及基因诊断的重要步骤，通常要求得到的片段长度不小于100～200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有10^7-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温冻存的组织细胞中提取，可采用传统方法，及在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现，也可用提取基因组DNA的试剂盒，该方法得到的DNA酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。按照产量可分为微量提取（微提）、中量提取（中提）、大量提取（大提），提取方法有一般提取（质粒粗提，如用于酶切鉴定）和试剂盒提取（质粒精提，如用于细胞转染）。

服务流程

客户提供

●   活细胞或新鲜/冷冻组织样本

●   质粒抽提请提供甘油菌或质粒及相关质粒信息（拷贝数、抗性等）

●   采用试剂盒提取方法需购买相应试剂盒（可有我司代购）

服务优势

●   专业的复杂组织样本处理技艺

●   标准化的核酸提取/纯化流程

●   全套的定性定量实施方案

●   提取核酸高浓度及纯度

●   真实清晰完整的报告呈现

北京健坤禾润科技有限公司（以下简称“健坤禾润”）成立于2011年4月，是一家提供专业医学科研服务咨询及技术服务的转化医学平台。

健坤禾润建有标准化的实验室，独立拥有一系列先进的硬件设施，包括confocal、流式仪、发光检测仪、MD酶标仪、实时定量PCR仪、独立细胞室、荧光显微镜等，并开展各种细胞原代分离、细胞处理、分子生物学、免疫生物学等研究，在细胞生物学、免疫学、分子生物学、蛋白质组学等领域已形成了专业优势。

健坤禾润拥有博士后、博士等一批专注于机制研究的科研人员。除单项技术服务之外，健坤禾润还可以为广大临床客户和科研工作者提供转化医学整体项目的方案设计、实验实施、数据分析、报告总结等一站式科研咨询和技术服务，目前我们已经与全国知名三甲医院、高校和科研院所建立了长期技术合作关系。

健坤禾润密切关注和跟踪国内外各个医学学科的研究动态与进展，用科研机制的方式验证、阐述疾病机理，提升科研的创新性和连续性。

服务内容涉及

分子生物学

qPCR；定点突变；多重PCR；数字PCR；SNP分型；核酸提取与纯化；基因克隆与表达质粒的构建

细胞生物学

细胞活力/增殖/凋亡/周期；细胞分离培养；荧光素酶报告基因试验；CRISPR/Cas9（细胞）；细胞转染/稳定细胞株构建；细胞共培养；细胞及亚细胞形态结构观测；EMT相关检测

免疫生物学

免疫组织化学（IHC）; ChIP/ChIP-seq/EMSA；Western-Blotting；免疫荧光（IF）；原位杂交（In Situ Hybridization）；IP/CoIP/CoIP-MS；酶联免疫吸附反应（ELISA）

蛋白质组学

蛋白芯片检测；蛋白质谱鉴定与序列测定；iTRAQ；双向凝胶电泳

官网：http://www.jkgreentech.com/

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