基因克隆与载体改造

实验原理

  

      ORF克隆是指从样本组织或细胞中抽提总RNA，设计合成特异性引物后，通过RT-PCR扩增获得目的基因的DNA序列：即从起始密码ATG到终止密码子，不含5′和3′UTRs非翻译区及内含子序列。

 

实验流程

 

 

实验结果展示

图1 目的基因的ORF克隆实验结果

A:样本1和样本2的RNA抽提电泳结果 ；B 不同扩增条件下目的片段的PCR扩增结果；C 目的片段酶切鉴定结果（T载体片段2692bp，目的片段1100bp）。

 

 

载体构建与改造

概述

 

     载体构建是分子生物学研究中最常用的实验技术。载体改造包括对载体MCS、启动子、增强子、筛选标志物等功能元件的改造等。随着基因功能研究的深入，对载体功能的要求越来越精细，我们可以将几个载体上的不同功能元件例如EGFP、T7启动子等或者外源基因的功能元件整合到特定的载体中，或者将多余的某原件从您需要的载体中去除以满足实验研究的需求。

 

实验步骤及技术服务内容

 

（1）目的DNA片段和载体的制备；

（2）目的DNA片段和载体的连接；

（3）连接产物的转化；

（4）克隆筛选；

（5）质粒提取；

 

 

技术服务内容

（1）以PCR为基础的各类载体构建，如细菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；

（2）基因克隆，包括基因定点突变等；

（3）载体改造；

（4）siRNA表达载体和miRNA表达载体构建。

 

服务说明

 

（1）客户提供载体构建及改造所需的实验方案，目的基因产物及序列（如果目的基因不好制备），载体（如果本公司载体库里没有）及相关背景资料。

（2）若客户只提供组织、细胞等样本，还需提供目的基因NCBI登录号，本公司将额外收取RNA提取及逆转录费用。

（3）对于表达载体、报道基因载体以及病毒载体等的构建，您需要提供序列资料、希望克隆到的载体、酶切位点等资料；

 

实验服务报告内容

 

（1）含目的片段的质粒、含该质粒的细菌各一份；

（2）引物序列、载体图谱、测序结果各一份； 

（3）载体构建技术服务相关产品说明书。

 

厦门生命互联科技有限公司坐落于厦门市海沧区生物医药产业园，是一家专注于生物领域实验技术服务的高新技术生物科技互联网公司，与厦门大学药学院共建生物医药技术中心，中心配备细胞实验室，设有万级无菌操作间，拥有完善的细胞、分子、生化、蛋白、动物实验平台，结合园区大型仪器共享平台，可给用户提供基因检测、分子克隆、免疫组化、细胞培养、动物实验等全方位实验技术服务。同时公司拥有一站式采购商城系统、项目管理系统、网络摄像互动系统等互联网工具，让客户在享受优质服务的同时，体验实验室互联网+带给客户的专业和便捷，引领科技时代服务行业的潮流！