细胞增殖

简介

    细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础，是细胞最基本的生理活动。方法有流式PI检测、Ki67法等。汉恒生物为您提供全方位的细胞增殖实验服务。

Cellcycle 流式细胞检测实验

    通常利用通常用PI染细胞核，PI在一定波长的光下发出荧光，其强度与DNA含量成正比。绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物，分选细胞。

实验步骤：

（1）将细胞以1×106接种于60mm培养板，80％汇合后转染。

（2）24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素（真核表达载体上的抗性标记）进行培养（该步可选）。

（3）48－72小时后用胰酶消化收集细胞，PBS洗两遍，弃上清，加入1ml 70％预冷乙醇中，吹打均匀，4℃固定12小时以上。

（4）PBS洗涤去乙醇，1000rpm, 5min，洗两遍。

（5）0.5 mlPBS重悬细胞，加入PI和 RNaseA至终浓度50µg/ml，37℃ 温浴30 min。

（6）用流式细胞仪测定周期。

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

RNaseA：10mg/ml

Ki67免疫荧光实验

    增殖细胞核抗原Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白质。 Ki-67抗原是目前多种恶性肿瘤尤其是乳腺癌研究中的热门生物指标，可以通过Ki-67抗原的检测，了解恶性肿瘤的细胞增殖活性。肿瘤增殖Ki67表达范围覆盖除G0 期以外的各增殖周期细胞。研究结果提示PCNA 和Ki67 均可较好地用于检测乳腺癌组织中的增殖细胞，二者基本可以互为代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表达，更具可用性。两者具有一定的互补性。Ki-67在低分化腺癌组织中的表达较在中高分化腺癌组织的表达明显升高，表明Ki67 染色阳性程度与组织学分级的相关性。表明Ki67表达与乳腺癌发生、发展有关,是一个不良预后因素，对乳腺癌的诊断治疗及预后评价有重要的参考价值。

实验结果图：