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该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。
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同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ) 技术由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。
原理
iTRAQ 技术采用4种或8种同位素编码的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，而后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。
iTRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质，包括三部分：一端是报告部分reporter group，另一端是肽反应部分peptide reactive group，中间部分是平衡部分balance group。
将蛋白质裂解为肽段，然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的，即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测，分子量完全相同，用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离，产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中，报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂，质量平衡基团丢失，产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团，不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时，多肽内的酰胺键断裂，形成一系列 b 离子和 y 离子，得到离子片段的质量数，通过数据库查询和比较，可以鉴定出相应的蛋白质前体。
实验样本：血浆、体液、组织、植物、细胞培养物、细菌及真菌等样本均可适用。
实验设计：样本制备、蛋白质同位素标记、高效液相分离、MS质谱分析、数据检索
技术特点
► 可同时对8个样品进行蛋白差异分析，节省样品的用量和检测的时间
► 二级碎片离子信号增强，产生质量更高的二级质谱，确保鉴定结果高的可信度
► 可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测
► 可分析详细分期型的临床疾病样本，并可设计样本重复，甚至可以进行个体样本的研究
► 二级碎片离子信号增强，产生质量更高的二级质谱，确保鉴定结果高的可信度
► 可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测
► 可分析详细分期型的临床疾病样本，并可设计样本重复，甚至可以进行个体样本的研究
检测仪器
TripleTOFTM5600系统把广泛定性探索，快速全貌解析，和高分辨率定量结合在一个单一精确质量平台的系统。在日采集中，它结合了最高的检测灵敏度，高分辨率和至少5倍最佳采集速度，以及稳定的质量准确度。是快速评估药物代谢稳定性、药物在体内特征和最终代谢产物鉴定的理想平台。
联系方式
北京蛋白质组研究中心
蛋白质组学国家重点实验室
电话：010-80705888, 010-80727777-1520
传真：010-80705155 QQ：1939330989
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