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单细胞凝胶电泳是一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞电泳形状颇似彗星,叉称彗星试验( comet assay)
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概念及原理:
单细胞凝胶电泳是一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞电泳形状颇似彗星,叉称彗星试验( comet assay)。该技术的原理是基于有核细胞的DNA分子量很大,DNA超螺旋结构附着在核基质中,用琼脂糖凝胶将细胞包埋在载玻片上,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜及其他生物膜破坏,使细胞内的RNA、蛋白质及其他成分进入凝胶,继而扩散到裂解液中,惟独核DNA仍保持缠绕的环区附着在剩余的核骨架上,并留在原位。若细胞受损,在碱性电泳液( pH>13)中,先是DNA双链解螺旋且碱变性为单链,单链断裂的碎片分子量小即可进入凝胶中,在电泳时断链或碎片DNA向阳极迁移,形成拖尾。
科研及临床应用:
单细胞凝胶电泳是一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,目前已被广泛应用于体内或者体外各种有核细胞经受试物诱导的DNA损伤、修复、细胞凋亡、毒理学、肿瘤治疗评价、放射生物学等方面的研究。
标本采集、保存、运输:
若是在液氮中冻存细胞,冻存管立即置于干冰中运输;若是新鲜培养细胞,待细胞铺满培养瓶底部(培养48h),将细胞培养瓶加满培养基,24h内(18-37℃)运输到实验室。实验所需试剂和药品请按照说明书保存条件运输。
客户须知:
客户需提供:
实验所需的细胞系(1×106个细胞,可传代),特殊细胞需提供培养基;
实验所需特殊或不常用试剂和药品。
报告形式:
本公司提供实验报告单,含主要实验步骤、单细胞凝胶电泳荧光图片。