慢病毒包装 慢病毒纯化

慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛，可以有效感染分裂期和静止期细胞，长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达，RNA干扰，microRNA研究以及活体动物实验中。

     服务项目

   本公司提供慢病毒载体构建，RNAi(shRNA)，miRNA，过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。
 

    整体实验流程

（一） 实验流程（1、2、3为并列步骤）

1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。

3.miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。

4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

(二)流程图

提供产品：

    最后提供1ml 滴度＞10^8PFU/ml，并免费提供对应的慢病毒对照。

博恒科创生物科技有限公司，是一家专注于生命科学和生物技术领域的高科技企业，是国内代理销售生物试剂、仪器的知名公司之一。公司成立于2010年12月12日，本着始终拥有的创业激情，自成立以来，每年销售保持高速增长，企业规模不断扩大。我们代理20多家欧美著名生物技术公司产品，销售的实验仪器、消耗品、分子生化试剂、免疫试剂和细胞培养试剂等，已被广泛应用于生命科学基础研究、开发应用、制药、疾病诊断与控制、人口与健康、生物技术等诸多领域。客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。我们在全国主要中心城市设有分公司和办事处，提供优质产品与服务。公司的目标是在生命科学和生物技术领域建成集生产、研究开发和销售于一体的国内外知名的一流企业集团。