分子与细胞生物学整体实验

　　百恩维生物平台为用户提供整体实验方案，包括从质粒构建、病毒包装、细胞培养、细胞感染、细胞建模以及细胞生物学功能检测等，通过评估客户需求，围绕公司特色，制定特有的实验方案，结合现有平台及扩展平台，利用分子细胞生物学技术，提供真实实验数据，全面满足客户的实验需求。 1 质粒构建 　　　提供干扰表达载体、micoRNA表达载体、以及过表达载体构建。 2 病毒包装 　　　提供相应的慢病毒、腺病毒、腺相关病毒包装。 3 RT-PCR 　　　RNA提取质量检测电泳图、RT-PCR扩增曲线示例（三重复避免系统误差）、RT-PCR数据分析示例（计算组内误差）、RT-PCR结果柱状图示例（检测干扰效率）、靶基因与内参溶解曲线图（检测扩增质量）、DNA片段扩增质量检测电泳图等。 4 Western Blot 　　　包括蛋白电泳图、灰度分析图。 5 下游细胞实验 5.1 下游靶基因表达量的鉴定 　　　常规出示的结果同样包括：RT-PCR、Western，如果涉及分泌蛋白，可以进行Elisa实验，客户可指定检测方法。 5.2 稳定株筛选实验 　　　在药物压力下筛选稳定表达细胞株，常规出示结果包括：RT-PCR、Western，客户可指定筛选及检测方法。实验过程：1. 含客户目的基因慢病毒包装：2. 细胞培养：感染实验前天接种细胞。转染时细胞密度达到60%~80%；3. 药物筛选稳定表达株图片，4. 稳定表达细胞株鉴定。周期2-3个月，提供T25稳筛细胞株一瓶或者冻存的细胞，具体价格敬请来电咨询。 5.3 克隆形成率实验 　　　采用结晶紫或吉姆萨染色法，检测转入靶基因后细胞增殖情况，常规出示结果包括：克隆染色图及柱状分析图。 5.4 细胞增殖实验 　　　采用CCK8或MTT方法，检测细胞增殖的情况，使用CCK-8方法，据活细胞线粒体内的脱氢酶可将试剂中的有效成分转变为难溶性的蓝紫色结晶物formazan，并可被酶标仪检测，间接反应活细胞数量。具体价格敬请来电咨询。（包括4组细胞，每个样品3-5个复孔，客户可以选择检测时间点。） 常规出示结果包括： 原始读数（每个样品5个重复） 细胞增殖曲线图 5.5 细胞周期实验 　　　采用PI染色的方法，在流式细胞仪上对细胞样品进行细胞周期分析 5.6 细胞凋亡分析 　　　采用Annexin V/PI；Annexin V-PE/7-AAD或客户自己提供合适的试剂盒，在流式细胞仪上对细胞样品进行细胞。 5.7 细胞迁移实验（Transwell） 　　　采用结晶紫或DAPI染色法，检测细胞迁移的能力。或用CKK-8法进行检测。客户需提供：检测细胞及其培养条件和处理方法。选择观察时间点。 5.8 细胞侵袭实验（Transwell+ Matrigel Basement Membrane Matrix） 　　　采用结晶紫或DAPI染色法，检测细胞侵袭的能力，铺有Matrigel的特殊滤膜，正常细胞不能自由穿过。在下室中加入趋化剂，上室加有经过处理的重悬肿瘤细胞，具有侵袭能力的肿瘤细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动，并粘附在滤膜下表面。具体价格敬请来电咨询。 5.9 细胞划痕实验 　　　通过对划痕部位距离差异的计算，检测细胞迁移能力 5.10 免疫荧光实验 　　　通过融合荧光蛋白或荧光二抗，鉴定目标蛋白细胞内定位，利用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体对细胞内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。流程：细胞爬片、转染或药物处理、固定透化、封闭、一抗孵育、荧光二抗孵育、荧光显微镜观察拍照。客户需要提供荧光一抗及二抗，具体价格敬请来电咨询。 5.11 粘附实验部分 　　　本平台是借助CCK8试剂盒可以检测活细胞的功能，检测不同处理组间的粘附差异。 5.12 酶联吸附实验（ELISA）4步骤帮您轻松检验各种蛋白大分子抗原 　　（1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。（2）加受检标本，保温反应，去除未结合物质。（3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫标抗体结合。（4）加底物显色。服务价格：检测3-5组样品，每组样品3个复孔，具体价格敬请来电咨询。

百恩维生物科技有限公司（BioWit Technologies），是一家专业从事生物科技前沿技术研发的高新技术企业。为国内外众多药厂和科研机构提供病毒包装，蛋白表达，载体构建，干细胞培养基，转染试剂、细胞因子等产品及技术服务。公司专家团队曾在国内外知名学府和国际一流制药公司从事研发多年。