![]() |
成功研发出一种具有自主知识产权且方便实用的miRNA定量检测技术(RAM),这种方法具有高灵敏度、高特异性、低成本等特点,目前已得到一定程度的应用。
|
|||||||||||||||||
[发表评论] [本类其他服务] [本类其他服务商] |
服务商: 北京唯尚立德生物科技有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
miRNA(microRNA)是一类长度约20-24nt的具有调控功能的非编码单链RNA,在细胞增殖、凋亡、器官发生、发育、造血以及肿瘤发生等若干途径中发挥重要作用。miRNA表达的定量分析是生物功能研究的基础,细胞、组织或血液中的miRNA的检测有助于发现新的早期诊断和预测疗效及患者预后的生物标志物。但是在对成熟的miRNA检测中,由于自身碱基数过少,同族miRNA之间通常只有一到两个碱基的差别,而且绝大部分miRNA在细胞中的表达水平都比较低,这些特性使传统检测方法受到很大限制。目前常用的检测miRNA方法有:
1、Northern Blot标准检测方法,缺点是灵敏度低,需要几十微克总RNA,费时费力
2、实时定量PCR检测基于实时荧光定量PCR和等温放大的方法,优点是灵敏度高
3、微阵列芯片检测方法基于基因芯片的方法,优点是通量高;缺点是有背景和杂信号干扰,特异性和准确度较差
4、大规模测序方法利用Solexa等大规模测序技术,进行高通量多样本的miRNA表达图谱的分析,但是成本较高。
miRNA检测方法
目前市场占主导地位的商品是Invitrogen公司(原ABI公司)开发的实时荧光定量PCR方法(TaqMan miRNA检测方法)该方法在一定程度上克服了上述缺陷,但是仍具有高成本的缺点。我们通过自主创新,成功研发出一种具有自主知识产权且方便实用的miRNA定量检测技术(RAM),这种方法具有高灵敏度、高特异性、低成本等特点,目前已得到一定程度的应用。
RAM检测方法的技术特点
1、灵敏度高:该方法的检测灵敏度高达1000个拷贝数,检测范围为103到1010拷贝数,该方法足以检测单个细胞中miRNA状况的变化
2、特异性好:能对miRNA中只有一个碱基差别的同族序列进行特异性检测。独特的RT-primer、bridge probes以及amplification primers(mainly P1)设计能够区分3′、5′及中间区域的碱基差异(Figure3)。更为独特的是,当实验设计目的为检测成熟miRNA时,即使pre-miRNA的含量高达100倍,对检测目标的干扰并不会比背景干扰高
3、样品处理简单:只需从样品中提取总RNA,无需特殊处理,可对其中的miRNA进行直接检测。可以检测约单个细胞的miRNA(每个细胞的总RNA量约为0.02ng),以及不同组织的miRNA。
4、成本较低,无须TaqMan探针等昂贵试剂
5、多种内参检测:我们方法可以对目前通用的内参U6 snoRNA检测,也可检测在组织中普遍稳定表达的mir-191等miRNA内参,可以方便的根据客户的需求设计不同的内参检测
我们提供的miRNA检测服务内容包含
miRNA相对定量检测
miRNA绝对定量检测
另外,我们也提供对mRNA的检测服务