服务项目:无菌细胞分选: 各种细胞系、原代细胞、肿瘤组织单细胞悬液等; 本仪器以分选为主,还承接流式分析实验,建议事先使用其它流式细胞仪确认细胞阳性染色比例。 如特殊情况确需本仪器分析的,请联系管理员。
原代细胞分选样本制备基本流程: 获取细胞悬液→荧光抗体染色→调整细胞浓度(参考Table 1)→过滤细胞→移入流式管→避光置冰上运至分选室→上机检测并设定分选条件→分选细胞→上机回测,检测纯度。
注:原代细胞分选前的细胞一定要过滤过(一般用300目滤网),否则会堵机器的。
分选所用的细胞染色方法与分析所用方法基本相同,但需要注意以下几点: a) 保证样本的无菌状态,因为分选得到的细胞还要继续培养; b) 不能使用固定剂固定细胞,因为活细胞经固定剂处理后即死亡; c) 保证上机样品为单细胞悬液; d) 准备充足的细胞,详见Table 1; e) 建议分选上样管中的缓冲液使用含2% FBS的PBS,普通培养基中的酚红可能会干扰分选;若 2 用培养基的话,颜色不能太深,血清浓度不能超过2%,否则粘性太大影响分选。 f) 如细胞分选后需再次培养,请准备含血清的收集管,在分选前交操作员。建议在5ml离心管中 加入1-2ml血清及其它必需组分,保证分选完毕时血清浓度大于5%; g) 如要分选GFP等转染的样品,请提供未经转染的相同细胞为阴性对照; h) 如要做多重荧光染色标本的分选,请提供各种单一荧光染色的标本; i) 如要去除死细胞,在不影响后续实验前提下,可以加入7-AAD或是PI; j) 快速简便的样本处理有利于分选:处理好的样本尽快上机,分选好的细胞尽快下一步实验,如 果要分选多个样本,建议一次处理一个,估计可能的上机时间后,再处理第二个样本
注意事项:由于在分选过程中,样本可能通过液滴震荡产生气溶胶,所以不接受会传播人类病原 菌的生物有害样本,也不接受含放射性生物样品。
本实验室所有仪器为MoFlo Astrios 超高速流式细胞分选系统是继MoFloTM XDP超速流式细胞分选系统之后的又一力作,效率及灵敏度更高,可应用于研究人员高效安全的生物解决方案。MoFlo Astrios 超高速流式细胞分选系统利用原始MoFlo技术和MoFloTM XDP的电子处理,其七个针孔空间分隔每个激光,提供了灵活可扩展的MoFlo分选功能。此外,MoFlo Astrios的超速流式细胞分选和多色分析的性能极佳,合理的人体工程学设计使它操作更快、更容易。
MoFlo Astrios超高速流式细胞分选系统是目前世界上最先进的流式细胞分选系统,实现了分选速度,分选纯度及回收率的完美平衡,最多可选包含散射光信号内的50个参数的信号(同时采集32个参数信号),分选速度也>70000细胞/秒的水平