双荧光素酶检测

双荧光素酶检测

     Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合以及miRNA与靶序列结合的重要手段。
    信诺金达主要提供2个方面的荧光素酶验证：
    启动子分析实验： 转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，通过测定两种荧光素酶的活性比值获得转录因子是否与启动子结合。
    miRNA与靶标基因的相互验证：通过测定两种荧光素酶的活性比值获得miRNA对靶基因调控作用的结果。
    由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后，报告基因表达的改变（监测荧光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用；结合定点基因突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。

启动子分析实验
客户提供:

    基因的名称、细胞株

    1.启动子预测
    2.启动子荧光素酶报告载体构建
    3.双荧光素酶检测
    4.完整的实验报告（包含载体构建序列、引物设计、载体图谱、载体测序报告、双荧光素酶检测报告）

miRNA与靶标基因的互作验证
客户提供:

    miRNA名称、靶基因名称、细胞株

    1.miRNA与靶基因预测
    2.双荧光素酶报告基因野生型载体构建
    3.双荧光素酶报告基因突变型载体构建
    4.双荧光素酶检测
    5.完整的实验报告（包含载体构建序列、引物设计、对应靶位点、载体图谱、载体测序报告、双荧光素酶检测报告）

启动子载体图谱和荧光素酶作用原理