慢病毒包装
产品介绍:
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链 RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后 的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生RNAi干扰。
慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感 染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒 载体,有鲜明的特色。大量文献研究表明,慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬 细胞等。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。
技术特点:
1、将目的基因/RNAi基因转入难以转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞;
2、制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株;
3、将目的基因/RNAi基因转入动物组织,以期获得长期表达;
4、转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。
服务流程:
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A. 慢病毒载体的构建:
根据不同的研究需求构建慢病毒载体,如用于RNAi的慢病毒载体、用于基因过表达的慢病毒载体、用于启动子活性研究的慢病毒载体等;
B. 慢病毒包装过程:
将重组病毒质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。
应用案例:
bio-equip.com
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艾游生物代做实验,专业提供实验技术服务,服务具体如下:
分子生物学:
1.基因突变
定点突变 缺失突变
2.T载体构建
3.表达载体构建
基因钓取 引物设计 载体购买 DNA抽提 RNA抽提 RT PCR 胶回收 质粒抽提 双酶切 连接
4.实时定量荧光PCR
绝对定量 mRNA表达定量 DNA芯片数据验证 siRNA筛选 MicroRNA表达定量
5.SNP分型
PCR技术
蛋白检测:
1.ELISA 2.免疫组化 3.免疫荧光 4.Western blotting 5.明胶酶谱
蛋白相互作用
1.Co-IP 2.GST-pull down
蛋白表达与纯化
1.原核表达 2. 蛋白纯化 3.蛋白偶联 4.抗体纯化
表观遗传学(基因表达调控的研究)
1.启动子载体构建 2.启动子甲基化 3.双萤光素酶报告基因检测 4.EMSA 5.ChIP
细胞生物学
1.瞬时转染: 基因、SiRNA、microRNA
2.稳定转染
3.细胞凋亡
4.细胞活力测定
5.双萤光检测
6.流式细胞检测
SiRNA
1.ShRNA设计与合成
2.ShRNA筛选
3.shRNA表达载体的构建
病毒包装
1. 慢病毒载体构建及包装服务
2.腺相关病毒载体构建及包装服务
3.腺病毒载体构建及包装服务
抗体制备
1.单克隆抗体制备
表达载体构建、蛋白纯化、蛋白偶联、proteinG法纯化抗体、抗体检测-western-blot、杂交瘤细胞株制备
2.多克隆抗体制备
microRNA功能及表达调控
1.microRNA表达谱系分析
组织、细胞
2.microRNA功能及表达调控
功能鉴定、靶基因筛查、表达调控研究
PCR-array
细胞凋亡PCR-array
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