流式细胞术检测技术服务

    1) DNA倍体分析、DNA含量分析、细胞周期、细胞凋亡。

    2) 细胞表面抗原分析：淋巴细胞免疫分型、白血病及淋巴瘤免疫分型、血小板相关抗体分析、HLA-B27、PNH相关抗原检测（CD55/CD59）、胞内细胞因子检测等。

    3) 其它指标：细胞内钙离子测定、耐药基因检测（p170、MRP、LRP）及凋亡基因（P53、CD95、c-erb B2、Bcl-2及Bax）等。

    1) 单个细胞：1~2×10⁶ 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠等。

    2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。

1、  实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。

2、  送检样本量：

        1)、单个细胞：1~2×10⁶ 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠等。

        2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠等。

3、  用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。

4、  我公司在正式接受实验委托一到两周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。

5、  低于5000元用户须一次性全额预付实验费，高于5000元，客户预付实验全款的50。

6、  部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。

7、  由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。

8、  请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。

9、  请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。

 

附：流式细胞术检测样品推荐制备方法：

 

A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：

    (1) 、收集1×10⁶个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。

    (2) 、用4多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。

    (3) 、用1ml含5 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×10⁵个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1 多聚甲醛固定，待测即可。

    (4) 、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。

 

B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：

    (1)、收集2×10⁶个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。

    (2)、用2ml 4多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；

    (3)、用1ml含0.2Triton-X100和5血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。

    (4)、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。

    (5)、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。

    (6)、加入0.5ml 1多聚甲醛重悬细胞；固定待测。

    (7)、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。

 

C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：

    (1)、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。

    (2)、用4℃预冷的70冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。

    (3)、调整细胞浓度为10⁶细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。

    (4)、PI染液终浓度为50mg/ml，RNase A终浓度为20ug/ml。

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