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MicroRNA (miRNA) 荧光定量PCR服务

MicroRNA (miRNA) 荧光定量PCR服务


microRNA Real-Time PCR Assay
由于miRNAs在众多程序的调控,诸如发育、细胞增殖和凋亡以及肿瘤发生相关等领域发挥作用,因此miRNAs的鉴定和定量研究成为迅速发展的研究领域。
服务类别:分子与细胞总访问:1223
最后更新:2012-4-3半年访问:7
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一、什么是miRNA?

MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(双链)但是和siRNA密切相关。据推测,这些非编码小分子RNA(miRNAs)参与调控基因表达,但其机制区别于siRNA介导的mRNA降解。第一个被确认的miRNA是在线虫中首次发现的lin-4 和let-7,随后多个研究小组在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRN As 。
 
二、miRNA荧光定量PCR基本原理
实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光试剂,利用荧光信号实时检测PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。但是就成熟的microRNA而言,由于其是由21-25个核苷酸组成的小RNA,长度太短,并不能通过传统的实时定量PCR进行检测,但是通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,配合实时定量PCR引物及探针可以精确检测微量样品中microRNA表达水平,也可以用终点PCR法定性检测。

 

 

三、Micro RNA荧光定量PCR优点:
microRNA
实时定量PCR是一种最近才发展起来的检测技术,其技术细节还在不断完善中,但是microRNA 实时定量PCR检测系统,相对其它microRNA检测技术有以下优点:
1.
高特异性
只对成熟 microRNA 进行定量,有效区分成熟 microRNA分子和前体分子以及其它成熟 microRNA的同源分子;
2.
简便快捷 省时省力
整个操作只需两步,不到3个小时,即可获得高质量的数据;
3.
检测灵敏 节省样品
样品消耗少,仅需 1-10ng 的总 RNA50pg左右的 microRNA
4.
超宽的线性范围,可跨越 7 个数量级;

四、Micro RNA荧光定量PCR服务要求
1. 尽可能提供新鲜的、充足的材料或直接提供纯化好的总
RNA (大于 5 ug/ 样品),直接纯化好的D NA 也要大于 5 ug/ 样品。
2.
通过 E-mail或其它方式提供已知的全长基因序列。
3.
请尽可能提供详细的背景资料: DNA/ RNA 来源、丰度等。

五、Micro RNA荧光定量提供服务
1.
根据客户提供基因序列设计引物。
2.
帮助客户提取Micro RNA
3. Real Time PCR(
荧光定量PCR),实验结果分析
4.
实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料

 

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