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cDNA文库构建,全长文库构建，，酵母双/单杂交文库构建，膜蛋白酵母文库构建，腺病毒包装文库构建，慢病毒包装文库构建，真核/原核表达文库构建，消减文库构建，基因组文库构建，RACE服务等。
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| 服务商： 上海海科生物技术有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
一、初级cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC，Total RNA的提取。
1.2 mRNA的分离。
1.3 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.4 对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.5 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。
1.6 将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.7 cDNA文库的QC。
a) 检测文库库容量。
b)每个文库随机挑取32个克隆子，PCR检测检测平均插入片段大小，阳性率。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug的总RNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告。
4.质量标准
4.1 文库库容量：大于0.5*10^7 CFU。
4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
4.3 阳性率：大于95%。
4.4 我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法（比如SMART方法），具有以下优势：
1）我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成，没有经过任何扩增的过程,最大限度的保证了文库的质量和忠实性。
2）使用了目前市场上最好的反转录酶(Superscrip III)，保证文库的片段长度和全长率，该普通文库的全长率会在45%以上。
3）使用重组的方法，不经过任何的酶切过程，不用担心cDNA被切断而影响文库质量，重组效率较酶切连接高很多，可以大大提高原始文库的库容量（可以达到0.5*10^7 CFU 以上的原始文库库容量）。
5.服务时间
20个工作日内。
二、全长cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC，Total RNA的提取。
1.2 mRNA的分离。
1.3 采用CAP Trapper法进行全长mRNA的富集。
1.4 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.5 对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.6 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。
1.7 将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.8 cDNA文库的QC。
a) 检测文库库容量。
b)每个文库随机挑取32个克隆子，PCR检测检测平均插入片段大小，阳性率。
c) 随机挑取24个克隆进行正向测序，通过NCBI的BLSTAX分析全长率。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug的总RNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，24个克隆正向测序报告，文库构建报告。
4.质量标准
4.1 文库库容量：大于1*10^6 CFU。
4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
4.3 阳性率：大于95%。
4.4 全长率：大于65%。
4.5 我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法具有以下优势：
1）我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成，没有经过任何扩增的过程,最大限度的保证了文库的质量和忠实性。
2）使用了目前市场上最好的反转录酶(Superscrip III)，保证文库的片段长度。
3）使用重组的方法，不经过任何的酶切过程，不用担心cDNA被切断而影响文库质量，重组效率较酶切连接高很多，可以大大提高原始文库的库容量。
5.服务时间
25个工作日内
三、高全长比例全长cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC，Total RNA的提取。
1.2 mRNA的分离。
1.3 使用特殊的抗体进行全长mRNA的富集。
1.4 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.5 对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.6 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。
1.7 将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.8 cDNA文库的QC。
a) 检测文库库容量。
b)每个文库随机挑取32个克隆子，PCR检测检测平均插入片段大小，阳性率。
c) 随机挑取24个克隆进行正向测序，通过NCBI的BLSTAX分析全长率。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug的总RNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，24个克隆正向测序报告，文库构建报告。
4.质量标准
4.1 文库库容量：大于1*10^6 CFU。
4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
4.3 阳性率：大于95%。
4.4 全长率：大于85%。
4.5 我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法具有以下优势：
1）我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成，没有经过任何扩增的过程,最大限度的保证了文库的质量和忠实性。
2）使用了目前市场上最好的反转录酶(Superscrip III)，保证文库的片段长度。
3）使用重组的方法，不经过任何的酶切过程，不用担心cDNA被切断而影响文库质量，重组效率较酶切连接高很多，可以大大提高原始文库的库容量。
5.服务时间
35个工作日内
四、均一化cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 对原始文库进行QC。
1.2 通过铺板培养，抽提初级cDNA文库的混合质粒；
1.3 基因组DNA的提取和酶切处理
1.4 基因组DNA亲和体系的构建
1.5 基因组DNA与混合质粒的饱和杂交
1.6 洗脱质粒转化DH10B感受态细胞
1.7 均一化cDNA文库的鉴定
a) 检测库容量（总CFU）
b) 随机挑取32个克隆子，PCR方法检测平均插入片段大小。
c) 抽提均一化cDNA文库的混合质粒（大抽），qPCR检测均一化前后两个文
库总质粒中两个看家基因的表达量差异，以判断均一化的效果。
1.1 对原始文库进行QC。
1.2 通过铺板培养，抽提初级cDNA文库的混合质粒；
1.3 基因组DNA的提取和酶切处理
1.4 基因组DNA亲和体系的构建
1.5 基因组DNA与混合质粒的饱和杂交
1.6 洗脱质粒转化DH10B感受态细胞
1.7 均一化cDNA文库的鉴定
a) 检测库容量（总CFU）
b) 随机挑取32个克隆子，PCR方法检测平均插入片段大小。
c) 抽提均一化cDNA文库的混合质粒（大抽），qPCR检测均一化前后两个文
库总质粒中两个看家基因的表达量差异，以判断均一化的效果。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少1*10^6 CFU的文库菌液，200ug以上的基因组或2mg以上的组织样本。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告。
4.质量标准
4.1 文库库容量：大于1*10^5 CFU。
4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
4.3 阳性率：大于95%。
4.4 均一化后相对于均一化前看家基因拷贝数降低50倍以上。
5.服务时间
15个工作日内
五、消减cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 样本的QC
1.2 分别抽提Tester和Driver样本的RNA
1.3 分别分离Tester和Driver样本的mRNA
1.4 双链cDNA的合成
1.5 cDNA的酶切
1.1 样本的QC
1.2 分别抽提Tester和Driver样本的RNA
1.3 分别分离Tester和Driver样本的mRNA
1.4 双链cDNA的合成
1.5 cDNA的酶切
1.6 cDNA杂交
1.7 PCR扩增，连接到T载体，转化。
1.8 消减文库的检测
a) 检测库容量（总CFU）
b) 随机挑取32个克隆子，PCR方法检测平均插入片段大小。
b) 随机挑取32个克隆子，PCR方法检测平均插入片段大小。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug的总RNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），PCR产物，随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告。
4.质量标准
4.1 阳性率：大于95%。
5.服务时间
30个工作日内
六、酵母双杂交（酵母单杂交）cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC
1.2 Total RNA的提取。
1.3 mRNA的分离。
1.4 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.5 对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.6 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。
1.7 将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.8 cDNA文库的QC。
a) 检测文库库容量。
b)随机挑取32个克隆子，PCR检测平均插入片段大小，阳性率。
1.9 初级文库铺板，抽提质粒
1.10 初级文库质粒与PDEST22（或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定载体，根据客户需求确定载体）载体进行重组反应，电转化，检测文库质量。
a) 检测文库库容量。
b)每个文库随机挑取32个克隆子，PCR检测平均插入片段大小，阳性率。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug总RNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），扩增后初级文库甘油菌，初级文库中抽质粒，随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告，酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。
4.质量标准
4.1 文库库容量：大于1*10^7 CFU。
4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
4.3 阳性率：大于95%。
5.服务时间
30个工作日内
七、Fosmid文库构建
1. 服务流程
1.1 样本的QC
1.2 高质量基因组DNA的提取
1.3 基因组DNA的打断条件优化
1.4 基因组DNA的打断处理
1.1 样本的QC
1.2 高质量基因组DNA的提取
1.3 基因组DNA的打断条件优化
1.4 基因组DNA的打断处理
1.5 打断后的DNA连接到载体
1.6 连接产物的包装和侵染大肠杆菌细胞
1.7 fosmid文库的检测
a) 检测库容量（总CFU）
b) 随机挑取16个克隆子，抽提质粒，酶切检测插入片段大小与阳性率。
b) 随机挑取16个克隆子，抽提质粒，酶切检测插入片段大小与阳性率。
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取200ug基因组DNA的样本，或者至少200ug的基因组DNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的fosmid文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的质粒酶切鉴定电泳图，文库构建报告。
4.质量标准
4.1 滴度：大于1*10^5
4.2 阳性率：大于90%。
4.3 平均插入片段：大于35Kbp
5.服务时间
35个工作日内
八、RACE
1. 服务流程
1.1 样本的QC
1.2 RNA的提取
1.1 样本的QC
1.2 RNA的提取
1.3 RNA去磷酸化
1.4 RNA去帽子结构
1.4 RNA去帽子结构
1.5 RNA连接头
1.6 反转录
1.7 PCR扩增
2.送样要求
2.1 针对每个文库，客户需提供至少能提取50ug RNA的样本，或者至少50ug的RNA。
2.2 提供要得到基因的已知序列 (大于300bp)。
3.发货内容
3.1 RACE的测序以及拼接结果，克隆后的质粒和菌液。
4.质量标准
4.1 由于RACE的特殊性，无法预知一定可以得到多长的序列，我们保证得到的序列和客户提供的已知序列是在同一个基因上。
5.服务时间
30个工作日内
手机版：文库构建
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