蛋白免疫印迹技术服务

• 蛋白质抽提
  • 实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
  • 实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。

2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。
5. western blot膜的封闭和抗体孵育

• 膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
• 封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
• 加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。

6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDH/Actin的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。

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公司拥有从事基因工程、细胞工程、单克隆抗体研究的现代化实验室和先进的精密设备，如：实时PCR 扩增仪、多肽合成仪、 DNA 合成仪、 DNA 序列分析仪、 FPLC 、高压液相色谱仪、冻干机、 CO2 培养箱、大型摇床等。

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