(一)原理
细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域,发展成一种重要生物技术,并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短,性状与体内相似,适用于研究。一般说来,幼稚状态的组织和细胞,如:动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
(二)操作
1.取材
用颈椎脱位法使乳兔迅速死亡。然后,把整个动物浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒,取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤,剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿中。
2.切割
用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗三次,然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎,直到成1mm3左右的小块,再用PBS清洗,洗到组织块发白为止。移入无菌离心管中,静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底,弃去上清。
3.消化、接种培养
吸取0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液1ml,加入离心管中,与组织块混匀后,加上管口塞子,37℃水浴中消化8~10分钟,每隔几分钟摇动一下试管,使组织与消化液充分接触,静止,吸去上清,向离心管中加入5~10ml含5%小牛血清的MEM培养基,用吸管吹打混匀,移入二个培养瓶中,置于二氧化碳培养箱中培养。
(三)结果
细胞接种后一般几小时内就能贴壁,并开始生长,如接种的细胞密度适宜,5天到一周即可形成单层。
传代细胞培养
(一)原理
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养。
细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。
常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。细胞接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力最好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
(二)操作
1.将长成单层的原代培养细胞或HeLa细胞从二氧化碳培养箱中取出,在超净工作台中倒掉瓶内的培养液,加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜),静置5~10分钟。
2.在倒置镜下观察被消化的细胞,如果细胞变园,相互之间不再连接成片,这时应立即
在超净台中将消化液倒掉,加入3~5ml新鲜培养液,吹打,制成细胞悬液。
3.将细胞悬液吸出2ml左右,加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液,盖好瓶塞,送回二氧化碳培养箱中,继续进行培养。
(三)结果
一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2~4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。
三、器材及液体的准备和无菌操作的注意事项
(一)器材和液体的准备
细胞培养用的玻璃器材,如:培养瓶、吸管等在清洗干净以后,装在铝盒和铁筒中,120℃,2小时干烤灭菌后备用;手术器材、瓶塞、配制好的PBS液用灭菌锅15磅,20分钟蒸气灭菌;MEM培养液、小牛血清、消化液用G6滤器负压抽滤后备用。
(二)无菌操作中的注意事项
在无菌操作中,一定要保持工作区的无菌清洁。为此,在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。操作前20~30分钟起动超净台吹风。操作时,严禁说话,严禁用手直接拿无菌的物品,如瓶塞等,而要用器械,如止血钳、镊子等去拿。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞,打开之前用乙醇将瓶口消毒,打开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下,打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后,加上瓶塞,才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端,将尖端在火上烧一下,戴上胶皮乳头,然后再去吸取液体。总之,在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
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【地址】 重庆高新区生物医药研发产业园D栋
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公司简介
重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司(简称“威斯腾生物”)是重庆高圣医药有限责任公司参与组建,放眼于全球生物医药前沿技术转化应用开发,立足于全国生物医药研发检测合作及项目孵化、成果转化,现在发展为一家集生物医药技术转化、分子诊断产品开发及创新生物药物开发的科技集团公司。威斯腾生物致力于重大疾病包括恶性肿瘤、重大传染病等领域的早期筛查及快速检测。公司总部设立于重庆高新区,同时在上海和北京设有管理团队和运行机构。
威斯腾生物拥有专家顾问团队千人专家7人,长江学者2人,海外院士2人;现有固定研发人员100余人同时还拥有320人的海外科研顾问团队。拥有完善的基础实验平台、先进的实验设备、专业的技术团队、标准的操作流程、优质的合作平台和强大的科学家网络,可为国内外研发机构与药企提供专业的生物研发检测合作和科技成果转化项目指导。七大基础服务平台包括:细胞生物学研究平台、分子生物学研究平台、病理学研究平台、免疫学研究平台、动物模型研究平台、蛋白质与多肽研究平台、测序和芯片研究平台。此外,公司拥有四大创新研发中心:分子诊断开发平台,CRISPR/Cas9靶向基因修饰药物开发平台、纳米靶向载药创新平台、创新药物筛选平台,除了进行公司的研发项目外,还可为从事相关研究的团队和企业提供个性化服务。
威斯腾生物研发中心一直致力于高端分子诊断产品的创新研发,拥有国内外处于领先地位的核心技术包括超微量核酸快速提取技术、快速荧光原位杂交(FISH)技术,CRISPR/Cas9基因定点编辑技术,荧光量子点材料开发和运用,医学模式动物开发等。
重点研发领域包括肺癌、结直肠癌、乳腺癌等恶性肿瘤的快速早期诊断,目前已成功开发非小细胞肺癌快速FISH诊断试剂盒、乳腺癌快速FISH诊断试剂盒、超微量粪便核酸快速诊断结直肠癌试剂盒等产品,其中非小细胞肺癌快速FISH诊断试剂盒入选重庆市技术创新与应用示范专项(产业类)重点研发项目名单,获中国生物医药创新创业项目最具投资价值TOP10评选赛北京站荣获一等奖、第八届中国创新创业大赛生物医药行业组重庆赛区冠军等。
同时,公司在重大传染病的快速检测及诊断上进行了研发布局,包括结核、EV71手足口病等重大传染病的快速诊断,拥有项目包括超微量尿液核酸检测结核试剂盒、量子点荧光标记传染病快速检测试剂盒等。新冠病毒疫情爆发后,威斯腾生物第一时间组建“新型冠状病毒试剂盒紧急研究小组”及“新型冠状病毒研发物资采购小组”,自筹经费成功研发新型冠状病毒(2019-nCoV)快速核酸检测试剂盒(免核酸提取荧光PCR一步法)、新冠病毒粪便RNA核酸提取试剂盒。产品已提供给20家以上的疾控中心和公共卫生中心使用,并与以上第三方疾控中心/公共卫生中心建立起了长期稳定的试用关系。
威斯腾生物是国家高新技术企业、科技型企业、市级新型研发机构、专精特新企业、北京市海淀区生物医药与大健康协会副会长单位、重庆市医药行业协会副会长单位。下属研发平台被认定为“中关村生物医药共享平台”、“中关村海淀区生物医药公共研发检测平台”、“重庆市生物医药检测共享平台”等。公司多次在全国性比赛中获奖,2019年荣荣获第八届中国创新创业大赛生物医药行业组重庆赛区冠军。
同时,威斯腾生物积极参与国际技术转移、成果转化相关合作,与美国、澳大利亚、新加坡等相关高校、研究院所建立了深厚的联系和多元化的合作,公司坚持以“技术创新、机制创新,文化创新,管理创新,战略创新”的理念,为重大恶性肿瘤、传染病疾病等领域的创新研发而不懈努力。
核心竞争力
- 荧光量子点材料开发和运用
- 快速荧光原位杂交(FISH)
- CRISPR/Cas9基因定点编辑技术
- 基因芯片诊断
- ChIP表观遗传研究
- 医学模式动物开发
产业布局:
- 科技服务
- ctDNA,CTC液体活检
- 病理医学诊断
- PDX肿瘤筛查
- POCT产品开发
- IVD产品开发
- 分子医学诊断
- 创新研发系统
行业交流
2015年12月 由中国医药企业发展促进会、中国医药科技成果转化中心主办,重庆市医药 产业发展办公室指导,威斯腾生物医药承办的“首届2015·中国(重庆)生物医药前沿技术与产业化发展研讨会”在重庆渝州宾馆隆重举行;
2016年4月 新加坡工程院院士、美国电子工程院连勇院士到威斯腾生物医药交流访问;
2016年6月 美中药协(SAPA)总会前会长、美国强生公司研发总监、美国药学家协会院士戴卫国博士到威斯腾生物医药交流访问;
2016年6月 威斯腾生物医药受邀参加第二届药学进展前沿高峰论坛;
2016年8月 威斯腾生物医药受邀参加2016北京生物医药科技成果展示暨项目推介会;
2016年10月 威斯腾生物医药受邀参加“科技部科技成果直通车暨首届科技成果路演活动”;
2016年10月 威斯腾生物医药受邀参加2016中国(泰州)抗体药物高峰论坛;
2016年11月 威斯腾生物医药受邀参加中国医药企业发展促进会第三次会员代表大会;
2016年11月 威斯腾生物医药成为诺奖医学峰会投资委员会常务委员单位;
2016年12月 威斯腾生物医药受邀参加北京市海淀区生物与健康产业协会第一届会员大会暨2016中关村核心区生物与健康产业发展高峰论坛;
2017年1月 威斯腾生物医药受邀参加首届国际未来论坛;
2017年1月 威斯腾生物医药受邀参加第二届中国天使两会双创年度盛典;
2017年3月 北京生物技术和新医药产业促进中心潘悦主任一行到威斯腾生物医药交流访 问;
2017年4月 威斯腾生物医药受邀参加四川省人民政府主办的医药健康产业深度合作和创新发展座谈会。
企业文化
公开透明的竞争文化机制
竞争文化的培养是企业文化着重培养的重要内容,良好的竞争氛围使每位员工不甘落后和停滞。采取正确的竞争策略,能够极大地调动企业员工的积极性、创造性,焕发出竞争精神和创新精神,使人的潜能得到全面、充分地发挥,从而使整个企业的竞争能力得到全面地提高。
公开透明的竞争机制的建立,使每位员工看到并享有畅通的晋升通道,保证每位员工在威斯腾都能一展所长。
重视素质培养和全面发展
威斯腾非常注重企业文化的建设,提倡“以人为本”的人才理念,关注员工的持续成长,倡导正能量,形成“勤奋,忠诚,热情,向上”的企业文化。
素质是人的品质、能力、素养的总称,企业员工的职业素质是影响企业管理与发展的重要因素。高素质的人才,不在于经验的长久,而在于长久的经验培育出来的能力。提升员工素质是揭示各个方面及竞争力的利器。员工个人不仅可以参加企业组织的各种培训,还主动积极的进行自我学习与提高,不断的修炼自我,提高自身的职业素质,从而达到与时俱进,增强竞争力。
和谐“家”文化
公司提倡和谐“家”文化,致力于为员工提供良好的办公环境、营造轻松舒适的办公氛围,公司在对员工关怀上下足了工夫,让每一位企业员工真正感受企业文化的力量。”威斯腾管理委员会委员如是表示。一个好的公司,不能仅仅只注重品牌的打造,更要重视人才、重视技术、重视企业文化建设。这就是一个富有朝气,活力的威斯腾生物!