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包括SNP与STR等,采用测序、Taqman探针、质谱、SNapShot与LDR等不同方法。
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包括SNP与STR等,采用测序、Taqman探针、质谱、SNapShot与LDR等不同方法。
1、 微卫星分析(STR)分析技术服务(片段分析)
短片段重复序列(short tandem repeat, STR)是由几个碱基对作为核心单位,串联重复形成的一类DNA序列,由于核心单位重复数目的变化,构成了STR基因座的遗传多态性。它分布于人类整个基因组,平均每15kb就存在一个STR基因座。人类基因组内已发现了七千个以上的STR位点。它具有分布广泛,易于检测,信息量大,有高度多态性并遵循孟德尔共显性遗传等优点。目前STR分析已广泛应用于遗传制图、连锁性分析、亲子鉴定、疾病基因定位和物种多态性研究等诸多领域。
1) 客户收集标本(血液或组织等标本)。
2) 根据客户提供的STR位点, 设计合成特异PCR扩增普通引物(荧光标记)引物。
3) 进行PCR扩增,得到不同大小的PCR产物,通过毛细管电泳检测, 获得扩增片段大小的数据。
4) 分析测序胶电泳检测的结果。
2、 测序方法
针对目标SNP位点,直接设计合适引物扩增得到含突变位点的PCR产物,并经序列测定得到位点信息,属SNP分析的金标准。
1) 根据已知序列设计引物或客户提供引物进行PCR,回收片段。
2) 对PCR产物进行测序反应。
3) 分析SNP位点的测序信号,得到结果信息。
3、 Taqman检测
针对目标SNP位点,设计合适Taqman探针扩增,并经荧光定量PCR仪检测得到位点信息。
1) 根据SNP位点设计Taqman探针与上下游引物。
2) 荧光定量PCR检测。
3) 分析定量结果,得到位点基因型。
4、 质谱
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)基因分型技术和荧光偏振光基因分型技术。引物延伸法指延伸引物在待检测SNP位点上延伸一个或若干个碱基,然后根据延伸产物所带荧光的不同或其分子质量的不同而确定其基因型。
实验步骤:
1) 人类基因组DNA的制备。
2) PCR和PCR产物的纯化。
3) 等位基因特异性引物延伸反应。
4) 等位基因特异性引物延伸反应产物的纯化。
5) MS样品的制备。
6) 自动检测、数据采集及等位基因分析。
5、 SNapShot
该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶,四种荧光标记的ddNTP,紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪跑胶后,根据峰的颜色可知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型,根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。
实验步骤:
1) 根据客户提供的SNP位点信息设计多重PCR引物。
2) 提取客户样品的基因组并以提取的基因组为模板用上述步骤中设计的多重PCR引物进行多重PCR以获得含有突变位点的DNA片段。
3) 以上述多重PCR产物为模板加入测序酶和与SNP位点相关的四种荧光标记的ddNTP进行单碱基延伸反应。
4) 将单碱基延伸产物进行测序仪毛细管电泳。
5) 对电泳结果进行SNP分析。
6、 LDR
高温连接酶检测反应技术(ligase detection reaction, LDR)是一种新兴的SNP分型检测方法。高温连接酶一旦检测到DNA与互补的两条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基错配,则连接反应就不能进行。
实验步骤:
1) 根据客户提供的位点信息进行分析并设计位点的多重PCR引物。
2) 提取客户样品的基因组并以提取的基因组为模板用上述步骤中设计的多重PCR引物进行多重PCR以获得含有突变位点的DNA片段。
3) 将得到的含有突变位点的DNA片段为模板用相同的多重PCR引物再次进行多重PCR以获得更多的含有突变位点的DNA片段。
4) 将含有突变位点的DNA片段进行LDR反应。
5) 将进行过LDR反应的产物用测序胶进行电泳。
6) 对电泳结果进行SNP分析。
我公司服务报价:
主要按照样本数量与目标位点数目进行定价
1) 检测位点数在10个位点以内的、样本数为1000个样本的价格一般在10元/样本/位点。
2) 检测位点数在10-25个位点、样本数为1000个样本价格一般在9元/样本/位点。
3) 检测位点数在25-96个位点、样本数为1000个样本价格一般在7元/样本/位点。
4) 如果样本数或位点数再增加的话我们再进一步协商,价格中不包含染色体抽提费用。
说明:上述各种技术从服务成本和价格角度而言,希望样本数量不少于1000个样本,若有样本数较少的情况可具体沟通。
(市场参考价格:一般在12-15元/样本/位点左右。)
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