文库构建

赛捷生物拥有一批优秀的文库构建专业技术人员，具有丰富的建库经验和成熟的实验方法，在cDNA合成、消化、连接及转化等方面拥有成熟的技术，采用Clontech公司SMART技术，建成的文库全长cDNA比例高，可用于大规模基因测序和目的基因的筛选。可以针对动物、植物、微生物等组织和细胞等材料进行文库构建。本公司可提供全方位的cDNA文库构建，包括：普通cDNA文库、全长cDNA文库、均一化cDNA文库、差减cDNA文库。 此外，可提供寡核苷酸文库、基因组文库等多种文库构建服务。

1. cDNA文库构建
cDNA文库是指某生物某发育时期所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。标准cDNA文库构建的基本原理是用 Oligo(dT)作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的cDNA加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得文库。每一个cDNA文库我们都会为您检测库容量，重组率和插入片段的平均大小。
（1）服务流程
1)客户样品QC
2)从材料中提取总RNA，分离mRNA
3)以mRNA为模板进行cDNA双链的合成
4)对合成的cDNA双链进行分级纯化
5）将分级纯化的dscDNA与sfiI酶切的pDNR-Lib载体连接。
6）将重组产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞
7）初级cDNA文库的QC
a)检测库容量（重组子克隆数目）。
b)每个文库随机挑取40个克隆子，PCR方法检测重组克隆子比例（重组率），检测平均插入片段大小。
c)每个文库随机挑取24个克隆子抽提质粒进行双向测序，通过序列分析判断插入片段是否含有全长ORF。
（2）您需要提供
1)注明样品的种属（如人，小鼠，大鼠等）；若为特殊物种，请注明该组织或细胞中的mRNA是否有polyA尾巴以及5’帽子结构
2)收集样品后，应将样品立即置于液氮或者-80℃冰箱中以避免mRNA的降解；运送样品时使用干冰保持低温
3)送样量要求：针对每个文库，客户需提供：（１）至少0.5g组织或1 x 108个或至少足够提取1.0 mg总RNA的细胞；（２）至少1.0 mg的总RNA

（3）我们提供
文库的甘油菌和分析鉴定书（包括总克隆数CFU的鉴定图，PCR鉴定图，测序图谱）
（4）质量保证
初始基因文库库容量 1 × 106pfu 以上，如需扩增，扩增后容量1×109pfu 以上；
插入片段平均长度 1.0~1.5kb( 非常规物种不承诺 ) ；
重组效率大于 90 ％（质粒文库），大于 70%( 噬菌体文库 )；
cDNA 的完整性，读框完整比例 ≥50% (仅对长度为 3 kb 以下的基因而言)。

2.基因组文库构建
    基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。反映基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上的定位，基因组中基因的结构和组织形式等。我公司利用限制性内切酶或机械随机剪切的方式消化基因组DNA，并将DNA片段插入特殊载体，构建基因组文库，并保证库容量和重组率。
（1）服务流程
1)高分子量基因组DNA的制备
2)基因组文库的构建过程
a)基因组DNA酶切体系条件的优化
b)基因组DNA酶切反应
c)DNA片段和载体的连接反应
d)电转化
3)文库的鉴定：检测库容量（重组子克隆总数目）；随机挑取克隆子进行抽质粒，酶切鉴定插入片段大小；插入片段的菌落比例（重组率）

（2）您需要提供
动物的血或细胞、新鲜植物叶片、活体昆虫或纯化好的DNA样品。
（3）我们提供
文库（10%甘油菌）以及菌落效价（CFU/ml）；随机抽样测序结果。
（4）质量保证
1)基因覆盖度达到10倍以上
2)重组率: >90%
3)文库库容量 1 × 106pfu 以上