蛋白生物学技术服务-原核表达

技术原理与实验步骤

将目的基因片段连接至合适的原核表达载体后，转化到大肠杆菌BL21（DE3）菌株内，随后利用菌自身的蛋白表达系统通过温度和诱导剂的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。原核表达系统是至今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，其优点是实验周期短、成本低、产量高。

优势

队伍专业，熟练掌握密码子优化、载体构建、等电点分析、表达纯化、包涵体变性复性等操作，在蛋白表达纯化及发酵生产实战经验丰富；仪器完备，拥有蛋白纯化所需的离子柱、分子筛、亲和柱、疏水柱、AKTA purifier系统。

密码子优化

根据原核细胞蛋白表达密码子偏好进行密码子优化，完善蛋白表达，解决蛋白无法表达及包涵体蛋白等问题。

原核表达

构建原核表达质粒，转化到BL21感受态细胞，IPTG诱导表达。

包涵体变性复性

蛋白在原核细胞中表达后，有时无法分泌到细胞质中，而是以包涵体的形式存在，无法从上清中获取，需收集包涵体，对包涵体进行变性复性，获取目的蛋白。

纯化

蛋白表达纯化专业人员，对研究蛋白进行等电点分析、疏水性分析等，丰富的经验，熟练的队伍，快速优质的纯化蛋白。

内毒素检测及去除

内毒素是菌体破裂后产生的毒素，主要成分是类脂质A，会引发人体发热、休克、白细胞反应等免疫反应，对于药用蛋白产品，需将内毒素清除，否则会引发安全问题。

服务流程

• 依据客户提供的蛋白基因、载体要求，设计克隆方案，构建原核表达载体。可提供6xHis、GST、MBP等携带标签及肠激酶、凝血酶等蛋白酶切除标签蛋白的表达载体，提供多种选择；
• 将构建好的质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）菌株内，优化温度、IPTG浓度等条件诱导蛋白表达，SDS-PAGE验证；
• 对蛋白性质进行分析，选择合适的方法分离纯化蛋白；
• 依据客户要求如蛋白纯度、是否需要带标签、带何种类型的标签、蛋白溶解缓冲液要求，是否冻干等提供最终蛋白产品，附加载体构建报告、SDS-PAGE检测报告、目的基因质粒、重组细菌菌株、重组表达菌株等信息。

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