RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术，即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段（19 －23bp）外源双链 RNA（double s`tranded RNA ）导入细胞中，通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解，从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段，有助于研究该基因在生物模型系统中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段
siRNA构建技术服务
本公司提供siRNA 载体的构建服务，siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shRNA ，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。
闪晶生物siRNA载体构建服务程序：
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计siRNA靶序列
A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA）。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板：
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。
收费标准 siRNA载体构建订单下载 个数
价格(￥)
时间
1-3个siRNA表达载体构建
1800.00/个
14个工作日
4－10个siRNA表达载体构建
1500.00/个
20个工作日
10个以上
协商
协商
闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个.
联系电话：021-54460831-11 E-mail: lou800624@163.com 乘车路线：火车站坐1号地铁到终点,然后换乘5号线到北桥站即可。
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上海闪晶分子生物科技有限公司，座落在上海闵行区，紫竹科技园；毗邻上海交大、华东师范大学，及国际知名跨国公司，学术氛围浓郁，具有得天独厚的人文环境。公司拥有1400平方实验大楼，配备有齐全的研发、实验设备，以满足日益增长的国内外客户需求，是专业从事生物技术服务的公司；公司拥有一批知名度较高的学科带头人和一支训练有素、多学科配合、以中青年科技人员为主的研究队伍。公司自研究所改制以来在分子生物学试剂盒、荧光定量PCR、siRNA载体构建、全基因合成、荧光探针修饰、多肽合成、dNTP、Pfu酶、热启动Taq酶、DNA marker、基因工程、原生质体的培养、细胞融合、单克隆抗体诊断试剂、细胞培养、细胞转染、病毒构建包装、Western Blot 、蛋白表达纯化等研究方向作了深入的研究；
公司拥有从事基因工程、细胞工程、单克隆抗体研究的现代化实验室和先进的精密设备，如：实时PCR 扩增仪、多肽合成仪、 DNA 合成仪、 DNA 序列分析仪、 FPLC 、高压液相色谱仪、冻干机、 CO2 培养箱、大型摇床等。
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