实时荧光PCR/实时荧光RT-PCR

 概念和原理

    Real-time PCR/real-time RT-PCR是在普通PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后可通过标准曲线或参比样本对模板中目的DNA/RNA片段进行定量分析的技术。根据采用的荧光基团的不同，可以初略分为Taqman探针法和SYBR Green染料法。

科研和临床应用

    由于可以从各种样本中大量扩增目的基因片段并进行相对或绝对定量，因此，可广泛应用于=感染性疾病病原体（如细菌、流感病毒、手足口病毒. HIV. HBV. HPV. EBV. CMV. TB.支原体、衣原体等）的检测与定量分析、肿瘤相关基因的检测与研究、药物对基因表达水平的影响、与药物疗效监控相关的基因的检测与研究等各种涉及到基因检测的领域。

标本采集、保存、运输

    全血样本：用EDTA抗凝管收集2 ml全血，颠倒混匀抗凝管8-10次，-80℃保存，冷冻运输。

    组织样本：新鲜组织样本离体后，用预冷PBS或生理盐水快速将表面残留的血迹冲洗干净，切成黄豆大小，装入2 0ml EP管或体积更大的旋盖冻存管中，立即置于液氮中冷冻3-4 h以上，然后转移至-80℃或液氮中保存，冷冻运输。

    细胞样本：离心收集细胞（≥1×1 06个），①DNA检测：液氮速涛，-80℃保存，冷冻运输：②RNA检测：加入适量（如使用TRIzol，通常为1 ml）细胞裂解液，反复吸打数次，直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于裂解液中形成清亮不粘稠的液体，-80℃保存，冷冻运输。

客户须知

客户需提供：

    新鲜足量的检测样本（血液、骨髓、组织、细胞、咽试纸等）或提取的质量合格的足量RNA/DNA。

    需检测的病原体名称或基因名称（中英文全称）。

报告形式：

提供扩增曲线图，ct值等。

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