动物siRNA/miRNA载体构建

动物miRNA载体构建

miRNA调控机理复杂，每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可 以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入， 将帮助我们理解高等真核生物的基因组的复杂性和复杂的基因表达调控网络。 
    信诺金达为您提供microRNA载体构建技术服务，您只需提供您要做的目的基因序列及登录号，信诺金达专业的技术人员为您完成microRNA靶位点序列设计分析、及microRNA载体构建。

服务要求

    miRNA序列或者登录号；
    具体的实验要求：标记，载体等。

服务基本流程

1. microRNA靶点的预测。利用软件得到的目的microRNA的预测靶点。
    2. 获得microRNA对应DNA模板。根据提供的靶序列，合成两条互补的单链DNA模板。或者，设计引物PCR扩增microRNA靶基因3’UTR序列。
    3. microRNA靶序列克隆 。将合成的两条单链退火成双链（具有粘性末端），或将PCR产物双酶切，后连入经过同样双酶切的miR-reporter载体中，连接产物转化大肠杆菌。
    4. 阳性克隆鉴定。挑选转化的菌落，PCR筛选含有插入片段的阳性克隆，测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
    5. 实验报告。

服务报告内容

    miRNA质粒或者菌液，测序报告和实验报告

动物siRNA载体构建

    siRNA，即与内源mRNA编码区同源的大约19-23nt的双链小分子RNA，通过特定反应解链后会与mRNA发生特异性结合，导致mRNA 降解而抑制特定基因的表达。基于上述原理，RNAi技术已广泛应用于功能基因组学研究中，如：基因敲除、转基因动物、模式动物、基因治疗及药物靶点筛选等 研究。与化学合成siRNA相比，siRNA 质粒载体有以下优点： 
    1.siRNA载体能够更有效阻遏相应基因的表达;
    2.更加稳定、易控制;
    3.可用于稳定的细胞系建立;
    4.可用于诱变系统的建立;
    5.可建立基因敲除的小鼠模型;
    6.含有GFP的载体可以用于监测转染效率。
    7.成本低廉。
    基于其坚实的分子生物学平台，信诺金达利用先进的siRNA设计软件和丰富的siRNA载体资源可为您提供精确而完善的动物siRNA载体构建服务。

服务要求

    目的基因序列或者登录号；
    具体的实验要求：标记，载体等。

服务基本流程

    1. 选择siRNA表达载体
    2. 设计siRNA靶序列
    3. 合成模板
    4. 酶切并测序鉴定
    5. 质粒转染细胞后提取RNA、反转录、real-time PCR检测干扰效果（您自备细胞系）。（可选）
    6. Western Blot检测蛋白水平干扰效果（您自备一抗）。（可选）

服务报告内容

    siRNA质粒或者菌液，测序报告和实验报告

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北京信诺金达生物科技有限公司
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