(一.)慢病毒载体构建
慢病毒(Lent virus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达的效果。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。
(二)病毒包装、扩增:
将鉴定正确的基因克隆到慢病毒载体,与辅助载体一起转染293T细胞进行包装;
将包装好的病毒超速离心收集;
将浓缩病毒进行滴定,滴定结果单位为PFU/ml(一般为5×108 PFU/ml以上,体积为500μl以上,根据客户需要,不同量有价格差异)
二、质量控制与鉴定:
测序鉴定
根据特定引物作RT-PCR鉴定
蛋白表达鉴定(根据客户要求并由客户提供高特异性抗体)
三、客户须知:
对于客户所要构建腺病毒的目的基因,客户须提供详细的基因相关信息,包括基因序列,载体序列,载体图谱。载体构建步骤所需时间,根据不同构建方案,需15到25个工作日。从合同签订之日起,客户需交纳首期技术服务费(50%服务费),方可进行实验。服务结束时一次结清余款。
客户需提供的信息及材料:
插入目的片段序列信息,原始载体序列信息,载体图谱,酶切分析图等。
鉴定正确的原始质粒,PCR引物及PCR鉴定方法说明(包括PCR体系及PCR条件)(非必需,或需协商),测序引物(非必需,或需协商)。
原始质粒的酶切鉴定报告、测序报告,如果客户确定基因的信息无误,这条非必需。
实验目的、要求,目的基因有无细胞毒性,是否需要构建对照病毒?
实验要求包括:
是否自行构建腺病毒载体?是否要求更换启动子、polyA等基因元件?
实验目的包括:
用于细胞实验还是动物实验,需要感染的细胞类型或动物模型类型。
四、我们的承诺:
构建腺病毒/慢病毒载体的时间约15到25个工作日。病毒的包装,扩增的时间约20到30个工作日。总计需要45-55个工作日。
提供重组穿梭载体或者siRNA载体,重组腺病毒载体的酶切及测序报告。
免费提供一管阴性对照(仅限通用型的,如果客户指定的序列,需要另外计费)。
最大插入片段5kb-8Kb。
补充说明:
如果客户需更换启动子,需保证所插入的基因的表达产物对细胞无毒害作用,
如果插入的目的片段太长,客户要求测序验证全长,需要提供基因的特异引物,以测得全长,加收一定的费用。
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北京艾比根生物技术有限公司(ABigen Corporation)是由一大批资深生物技术专业人士共同创办的高科技企业,从事生物技术产品的开发及销售。公司将先进的现代企业管理理念与强大的专业技术优势相结合,致力于将艾比根生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。目前公司经营分子生物学、细胞生物学,临床诊断,免疫试剂试剂,同时代理国外知名品牌耗材,分装sigma公司试剂,国内外仪器销售(英国PCR仪器,国产PCR仪,测序仪,合成仪器,离心机,诊断设备等)与一体,并提供高质量的RNAi技术服务(慢病毒介导)和分子生物学技术服务的高科技企业。
公司拥有专业的研发、生产团队,打造高性价比的自产产品; 同时拥有专业销售、技术服务团队,能提供高效、实用服务。艾比根生物秉承“尽力尽智,至善至美,艾比根生物”的理念,志在为国内科研工作者提供更好的实验条件,并立志树立中国自己的名族品牌!
艾比根理念: 尽力尽智,至善至美---艾比根生物
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