木瓜蛋白酶使用秘籍

一、基础知识
1.功能：木瓜蛋白酶可消化大部分蛋白底物，比胰蛋白酶范围更广。木瓜蛋白酶具有广泛的特异性，可断裂基础氨基酸，亮氨酸或甘氨酸的肽键。它还能水解脂类和酰胺类化合物。最佳pH范围为6.0-7.0。木瓜蛋白酶制剂应在使用前在活化溶液中孵育，以确保充分发挥活性。
2.抑制剂：PMSF、α2-巨球蛋白、Hg2+及其他重金属等
3.激活剂：EDTA、半胱氨酸、硫化物和亚硫酸盐

二、木瓜蛋白酶-Absin
1.外观：浅黄色或白色固体粉末
2.保存：2-8℃干燥保存，有效期1年
3.溶解：取适量本品溶于水配制成10mg/ml的储存液。使用前需经活化以得到完全酶活性，通常用含~5mM L-半胱氨酸的缓冲液来稀释，比如，常用酶活化缓冲液含1.1mM EDTA，0.067mM巯基乙醇和5.5mM半胱氨酸盐酸盐，经30min孵育后，酶得以完全活化。建议使用前经0.22um滤膜过滤除菌。

三、木瓜蛋白酶- Worthington
1.保存：2-8℃干燥保存，有效期6个月，注意：不要冷冻保存溶解或稀释后的溶液
2.溶解：可使用EBSS溶解，酶使用前应在含有1.1mM EDTA、0.067mM巯基乙醇和5.5mM 半胱氨酸-HCl的溶液中孵育30分钟。建议在溶解后和使用前经0.22um滤膜过滤除菌。
除此之外，Worthington还有一套木瓜蛋白酶解离系统（Papain Dissociation System）：
Worthington木瓜蛋白酶解离系统是一组用于Huettner和Baughman的神经细胞分离方法的试剂（J. Neurosci.，6，3044，1986）。每批均经过大鼠脊髓神经细胞分离性能测试，该试剂盒为每次解离提供新鲜制备的酶溶液。
1.组分：包装内含有足够的材料，可分离5个独立的组织等分试样，每个试样的体积可达 0.3-0.4cm3。对于较大的组织样本，应在每个步骤中按比例准备较大体积的试剂，并按照方案中所述的相同比例混合。
小瓶1：无菌Earle平衡盐溶液 (EBSS)，含钙、镁、碳酸氢盐和酚红，每包一瓶，100ml，用于配制剩下组分和稀释酶制剂。
小瓶2：含有L-半胱氨酸和 EDTA 的木瓜蛋白酶，每包含有5x100units一次性小瓶。使用时用5ml EBSS配制得到20units/ml的木瓜蛋白酶溶液，注意，木瓜蛋白酶溶液需要在 37°C下短暂孵育以确保完全溶解度和活性。
小瓶3：脱氧核糖核酸酶I (DNase)，每包5x2000units一次性试剂瓶。使用时用0.5ml EBSS配制得到2000units/ml的脱氧核糖核酸酶溶液。避免剧烈混合。
小瓶4：含牛血清白蛋白的卵粘蛋白酶抑制剂，每包一瓶。使用时用32ml EBSS配制得到10mg/ml的溶液，分装保存。 
2.保存：2-8°C下储存4-6个月。