Megazyme氨测定试剂盒（快速）使用说明书
简介：
氨是一种广泛存在的天然化合物，通常由微生物蛋白质分解代谢产生，因此可作为果汁、牛奶、奶酪、肉类、海鲜和面包制品的质量指标。与其他一些试剂盒不同，这种试剂盒的优点是使用了谷氨酸脱氢酶，这种酶不受单宁的抑制，例如葡萄汁和葡萄酒。K-AMIAR可用于手动测定氨（见第4页“A”）、自动分析仪格式（见第6页“B”）或微孔板格式（见第7页“C”）。在葡萄酒工业中，氨的测定是计算酵母有效氮（YAN）的重要环节。YAN包含三种高度可变的成分，游离铵离子、初级氨基氮（来自游离氨基酸）和L-精氨酸侧链的贡献。因此，为了最准确地测定YAN，应该对所有三种成分进行定量，这可以使用Megazyme的L-精氨酸/尿素/氨试剂盒（K-LARGE）和NOPA试剂盒（K-PANOPA）。1
原则：
在谷氨酸脱氢酶（GlDH）和还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）存在下，氨（铵离子；NH）与2-酮戊二酸反应生成L-谷氨酸和NADP（1）。4++
（GlDH公司）
（1） 2-酮戊二酸+NADPH+NH L-谷氨酸+NADP+HO4++2
NADP的形成量与氨的量是化学计量的。它是NADPH消耗量，通过340nm处吸光度的降低来测量。+2
特异性、敏感性、线性和精密度：
该分析对氨有特异性。在试剂级硫酸铵的分析中，预期结果约为100%。
测定的最小区分吸光度为0.005吸光度单位。这相当于最大样品体积为2.00 mL时样品溶液的浓度为0.018 mg/L。检测限为0.071 mg/L，其来源于最大样品体积为2.00 mL时吸光度差为0.020。
在每次测定0.2至7μg氨的范围内，测定呈线性（图2，第11页）。使用一种样品溶液进行两次测定时，吸光度差可能为0.005至0.010。当样品体积为2.00 mL时，这相当于约0.018至0.035 mg/L样品溶液的氨浓度。如果在样品制备过程中对样品进行稀释，则结果乘以稀释系数F。如果在样品制备过程中对样品进行称重，例如10 g/L，则预计差值为0.02至0.05 g/100 g。
干扰：
如果在分析规定的时间内（约3分钟）完成了氨的转化，一般可以得出没有发生干扰的结论。但是，这可以通过在反应完成后向反应杯中添加氨（约4μg/0.1 mL）来进一步检查。应观察到吸光度显著降低。
所分析样品中的干扰物质可通过包括内标物来识别。这一标准的定量回收率是可以预期的。样品处理和提取过程中的损失通过进行回收实验来确定，即在最初的提取步骤中向样品中添加氨水。
在碱性缓冲溶液中，蛋白质碎片可能缓慢释放氨，导致缓慢的蠕变反应。这不是这个药盒的问题，因为反应完成得太快了。
果汁中的单宁能显著抑制牛肉肝中的GlDH，这是一种用于氨水和尿素/氨水试剂盒的酶。然而，此试剂盒中使用的酶不受此限制（图3，第12页）。
安全性：
应遵守适用于所有化学物质的一般安全措施。
有关安全使用和处理本产品的更多信息，请参阅Megazyme网站提供的相关SDS。
工具箱：
可从Megazyme获得适用于以手动方式进行96次分析（或以自动分析仪方式进行960次分析或以酶标板方式进行960次分析）的试剂盒。试剂盒包含完整的分析方法以及：
瓶子1：缓冲液（36 mL，pH 8.0）加2-酮戊二酸和叠氮化钠（0.02%w/v）作为防腐剂。在4°C下稳定>2年。
瓶子2:（x 2）纳德夫。
在-10°C以下稳定5年以上。
瓶子3：谷氨酸脱氢酶悬浮液（2.2 mL）。
在4°C下稳定>2年。
瓶子4：氨标准溶液（5 mL，0.04 mg/mL）
0.02%（w/v）叠氮化钠。
稳定>2年；密封储存在4°C。
试剂溶液的制备：
1. 使用提供的瓶子1的内容物。在4°C下稳定>2年。
2. 在12毫升蒸馏水中溶解第2瓶的内容物。在4°C下稳定4周或在-10°C以下稳定2年以上（为避免重复的冻融循环，分为大小合适的小份并储存在聚丙烯管中）。
3 & 4.使用提供的瓶子3和瓶子4的内容物。将瓶子直立存放。使用前旋转瓶子3以混合内容物。在4°C下稳定>2年，稳定>2年；在4°C下密封储存。
注：注：氨标准溶液仅在对所用分光光度计的准确性有疑问或怀疑样品中的物质引起抑制的情况下进行分析。氨的浓度直接由NADPH的消光系数决定（第5页）。
设备（推荐）：
1. 玻璃试管（圆底；16 x 100 mm）。
2. 一次性塑料试管（1厘米光路，3.0毫升）。
3. 微量移液器，例如Gilson移液器（100μL）。®
4. 容积式移液器，如Eppendorf Multipette®
- 与12.5 mL Combitip[分配0.5 mL等分NADPH缓冲液（溶液2）]。®
- 用25 mL Combitip（分配2.0 mL蒸馏水）。®
5. 分析天平。
6. 分光光度计设置为340nm。
7. 涡流混合器（如IKA Yellowline试管振动筛TTS2）。®
8. 停止计时。
9. Whatman 1号（9厘米）滤纸。
A、 手动分析程序：
逆风阅读（光路上没有反应杯）或靠水
*例如，用塑料楔子或用反应杯盖或薄膜密封反应杯后轻轻翻转。®
如果样品的“蠕变”率大于空白，则将吸收（样品和空白）推回到悬浮液3的加入时间。
计算：
测定空白和样品的吸光度差（A-A）。从样品吸光度差中减去空白吸收差，从而获得δA。12氨
ΔA的值通常应至少为0.100吸光度单位，以获得足够准确的结果。氨
氨的浓度可计算如下：
如果样品在制备过程中被稀释，则结果必须乘以稀释系数F。
在分析为制备样品而称重的固体和半固体样品时，含量（g/100 g）根据称重量计算如下：
氨含量
=cammonia[g/L样品溶液]x 100[g/100 g]
重量[g/L样品溶液]样品
注：这些计算可以通过使用Megazyme Mega CalcTM来简化，可从Megazyme网站上的产品下载(www.megazyme.com).
B、 自动分析仪分析程序：
笔记：
1. 氨的自动分析仪分析程序可使用单点标准或全校准曲线进行。
2. 对于用于氨测定的每批样品，必须同时使用同一批试剂执行单点标准或校准曲线。
试剂制备如下：
R1的制备：
R2的制备：
示例方法：
C、 微孔板分析程序：
笔记：
1. 氨的微孔板分析程序可以使用单点标准或全校准曲线进行。
2. 对于用于氨测定的每批样品，必须同时使用同一批试剂执行单点标准或校准曲线。
*例如，使用微孔板摇床、微孔板读卡器上的摇床功能或重复抽吸（例如，使用容量为50-100μL的移液器）。
**如果样品的“蠕变”率大于空白，则将样品吸光度推回到悬浮液3的加入时间。
计算（微孔板分析程序）：g/L=ΔA x g/L标准x F样品
ΔA标准
如果样品在制备过程中被稀释，则结果必须乘以稀释系数F。
图1。显示K-AMIAR线性的校准曲线。用于产生该校准曲线的反应在37℃下使用10 mm路径长度的反应杯进行5 min。
样品制备（手工格式，A）：
1样品稀释。
反应杯（即0.1 mL待分析样品）中的氨含量应在0.2和7μg之间。因此，样品溶液必须充分稀释，以产生0.01和0.07 g/L之间的氨浓度。
稀释表
如果ΔA的值太低（例如<0.100），则称取更多样品或稀释得不太强烈。或者，通过移液管将样品体积增加至2.00 mL，确保反应中样品和蒸馏水成分的总和为2.10 mL，并使用方程式中的新样品体积。
2样品澄清：
Carrez试剂不能用于脱蛋白，因为它们的使用导致回收率显著降低。使用高氯酸或三氯乙酸作为替代品（见具体示例）。
三。一般考虑。
（a） 液体样品：透明、浅色和近似中性的液体样品可直接用于分析。
（b） 酸性样品：如果使用>0.1 mL的未稀释酸性样品（如葡萄酒或果汁），则可能需要使用2 M NaOH将溶液的pH值增加至约8.0。
（c） 二氧化碳：含有大量二氧化碳的样品应通过使用2 M NaOH将pH值增加至约8.0并轻轻搅拌或使用玻璃棒搅拌来脱气。
（d） 彩色样品：如果需要，对于彩色样品，应进行空白样品，即不含GlDH的样品。
（e） 颜色强烈的样品：如果使用未稀释、颜色强烈的样品，应添加0.2 g聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）/10 mL样品进行处理。用力摇晃试管5分钟，然后用Whatman 1号滤纸过滤。
（f） 固体样品：在蒸馏水中均匀化或粉碎固体样品，必要时过滤。
（g） 含脂肪样品：在高于脂肪熔点的温度下用热水提取此类样品，例如在60°C的100 mL容量瓶中。调整至室温，并用蒸馏水填充容量瓶中至刻度。在冰上或冰箱中保存15-30分钟，然后过滤。丢弃前几毫升滤液，并使用透明上清液（可能有点乳白色）进行分析。
（h） 含有蛋白质的样品：通过加入等量的1 M冰高氯酸并混合，使含有蛋白质的样品脱蛋白。以1500 g离心10分钟，并用1 M KOH中和上清液。或者，使用如下样品制备实例（c）中所述的三氯乙酸。
样品制备示例：
（a） 葡萄汁/葡萄酒中氨的测定。一般来说，白葡萄汁和红葡萄汁/果酱和葡萄酒中的氨浓度可以在不进行任何样品处理的情况下进行测定（过滤除外，必要时根据稀释表进行稀释）。如果要分析体积大于25μL的红酒，可能需要通过添加0.2 g PVPP/10 mL样品去除部分颜色。用力摇晃试管5分钟，然后用Whatman 1号滤纸过滤。通常，不需要稀释，25-50μL的样品体积是令人满意的。
（b） 果汁（如橙汁）中氨的测定。
使用2 M NaOH将25 mL过滤样品的pH值调节至约8.0。将溶液定量转移至50 mL容量瓶中，并用蒸馏水调节至所需体积。如果溶液颜色很深，可能需要添加0.2 g PVPP/10 mL样品以去除部分颜色。用力摇晃试管5分钟，然后用Whatman 1号滤纸过滤。通常，不需要稀释，0.1 mL的样品体积是令人满意的。
（c） 牛奶中氨的测定。
在玻璃试管中，精确混合1毫升牛奶和3毫升牛奶
0.3M三氯乙酸。在室温下培养5分钟以确保蛋白质完全沉淀，然后在室温下离心3分钟（2000 g）。倾析上清液，并使用pH测试条，用10 M KOH中和（高浓度KOH导致体积显著增加）。过滤，直接用清清上清液进行分析。一般情况下，不需要进一步稀释，需要最大2.0 mL的样品体积。
（d） 烘烤产品中氨的测定。
准确称取约10 g代表性材料，放入100 mL溶液中
杜兰瓶。添加20 mL 1 M高氯酸并均化®
使用Ultra turrax或Polytron均质机（或同等设备）2分钟。定量转移至40 mL玻璃烧杯中，并使用2 M KOH将pH调节至约8.0。定量转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水调至刻度（确保含脂层“在”刻度上，水层“在”刻度上）。在冰上储存20分钟以沉淀高氯酸钾，并使脂肪分离。过滤，丢弃前3-5 mL，并使用澄清滤液进行分析。通常，不需要进一步稀释，0.5 mL的样品体积是令人满意的。®®
（e） 肉和肉制品中氨的测定。
准确称取约5 g代表性材料放入100 mL Duran瓶中。添加20 mL 1 M高氯酸并使用Ultra turrax或Polytron均化器（或等效物）均化2分钟。定量转移至40 mL玻璃烧杯中，并使用2 M KOH将pH调节至约8.0。定量转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水调至刻度（确保含脂层“在”刻度上，水层“在”刻度上）。在冰上储存20分钟以沉淀高氯酸钾，并使脂肪分离。过滤，丢弃前3-5 mL，并使用澄清滤液进行分析。通常，不需要进一步稀释，0.5 mL的样品体积是令人满意的。®®®
（f） 甘草制品中氨的测定。使用杵和研钵使约3g样品均匀化，并准确称取约1g代表性材料至100ml容量瓶中。加入60毫升蒸馏水，在70℃下孵育10分钟，或直至完全溶解。使其平衡至室温，并用蒸馏水填充至标记处。过滤并使用略带颜色的滤液进行分析。通常，不需要进一步稀释，0.5 mL的样品体积是令人满意的。
（g） 水中氨的测定（如游泳池水）。
水的氨浓度通常可以不经任何样品处理而测定。一般情况下，不需要稀释，需要2.0 mL的样品体积。
氨是一种广泛存在的天然化合物，通常由微生物蛋白质分解代谢产生，因此可作为果汁、牛奶、奶酪、肉类、海鲜和面包制品的质量指标。与其他一些试剂盒不同，这种试剂盒的优点是使用了谷氨酸脱氢酶，这种酶不受单宁的抑制，例如葡萄汁和葡萄酒。K-AMIAR可用于手动测定氨（见第4页“A”）、自动分析仪格式（见第6页“B”）或微孔板格式（见第7页“C”）。在葡萄酒工业中，氨的测定是计算酵母有效氮（YAN）的重要环节。YAN包含三种高度可变的成分，游离铵离子、初级氨基氮（来自游离氨基酸）和L-精氨酸侧链的贡献。因此，为了最准确地测定YAN，应该对所有三种成分进行定量，这可以使用Megazyme的L-精氨酸/尿素/氨试剂盒（K-LARGE）和NOPA试剂盒（K-PANOPA）。1
原则：
在谷氨酸脱氢酶（GlDH）和还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）存在下，氨（铵离子；NH）与2-酮戊二酸反应生成L-谷氨酸和NADP（1）。4++
（GlDH公司）
（1） 2-酮戊二酸+NADPH+NH L-谷氨酸+NADP+HO4++2NADP的形成量与氨的量是化学计量的。它是NADPH消耗量，通过340nm处吸光度的降低来测量。+2
特异性、敏感性、线性和精密度：
该分析对氨有特异性。在试剂级硫酸铵的分析中，预期结果约为100%。
测定的最小区分吸光度为0.005吸光度单位。这相当于最大样品体积为2.00 mL时样品溶液的浓度为0.018 mg/L。检测限为0.071 mg/L，其来源于最大样品体积为2.00 mL时吸光度差为0.020。
在每次测定0.2至7μg氨的范围内，测定呈线性（图2，第11页）。使用一种样品溶液进行两次测定时，吸光度差可能为0.005至0.010。当样品体积为2.00 mL时，这相当于约0.018至0.035 mg/L样品溶液的氨浓度。如果在样品制备过程中对样品进行稀释，则结果乘以稀释系数F。如果在样品制备过程中对样品进行称重，例如10 g/L，则预计差值为0.02至0.05 g/100 g。
干扰：
如果在分析规定的时间内（约3分钟）完成了氨的转化，一般可以得出没有发生干扰的结论。但是，这可以通过在反应完成后向反应杯中添加氨（约4μg/0.1 mL）来进一步检查。应观察到吸光度显著降低。
所分析样品中的干扰物质可通过包括内标物来识别。这一标准的定量回收率是可以预期的。样品处理和提取过程中的损失通过进行回收实验来确定，即在最初的提取步骤中向样品中添加氨水。
在碱性缓冲溶液中，蛋白质碎片可能缓慢释放氨，导致缓慢的蠕变反应。这不是这个药盒的问题，因为反应完成得太快了。
果汁中的单宁能显著抑制牛肉肝中的GlDH，这是一种用于氨水和尿素/氨水试剂盒的酶。然而，此试剂盒中使用的酶不受此限制（图3，第12页）。
安全性：
应遵守适用于所有化学物质的一般安全措施。
有关安全使用和处理本产品的更多信息，请参阅Megazyme网站提供的相关SDS。
工具箱：
可从Megazyme获得适用于以手动方式进行96次分析（或以自动分析仪方式进行960次分析或以酶标板方式进行960次分析）的试剂盒。试剂盒包含完整的分析方法以及：
瓶子1：缓冲液（36 mL，pH 8.0）加2-酮戊二酸和叠氮化钠（0.02%w/v）作为防腐剂。在4°C下稳定>2年。
瓶子2:（x 2）纳德夫。
在-10°C以下稳定5年以上。
瓶子3：谷氨酸脱氢酶悬浮液（2.2 mL）。
在4°C下稳定>2年。
瓶子4：氨标准溶液（5 mL，0.04 mg/mL）
0.02%（w/v）叠氮化钠。
稳定>2年；密封储存在4°C。
试剂溶液的制备：
1. 使用提供的瓶子1的内容物。在4°C下稳定>2年。
2. 在12毫升蒸馏水中溶解第2瓶的内容物。在4°C下稳定4周或在-10°C以下稳定2年以上（为避免重复的冻融循环，分为大小合适的小份并储存在聚丙烯管中）。
3 & 4.使用提供的瓶子3和瓶子4的内容物。将瓶子直立存放。使用前旋转瓶子3以混合内容物。在4°C下稳定>2年，稳定>2年；在4°C下密封储存。
注：注：氨标准溶液仅在对所用分光光度计的准确性有疑问或怀疑样品中的物质引起抑制的情况下进行分析。氨的浓度直接由NADPH的消光系数决定（第5页）。
设备（推荐）：
1. 玻璃试管（圆底；16 x 100 mm）。
2. 一次性塑料试管（1厘米光路，3.0毫升）。
3. 微量移液器，例如Gilson移液器（100μL）。®
4. 容积式移液器，如Eppendorf Multipette®
- 与12.5 mL Combitip[分配0.5 mL等分NADPH缓冲液（溶液2）]。®
- 用25 mL Combitip（分配2.0 mL蒸馏水）。®
5. 分析天平。
6. 分光光度计设置为340nm。
7. 涡流混合器（如IKA Yellowline试管振动筛TTS2）。®
8. 停止计时。
9. Whatman 1号（9厘米）滤纸。
A、 手动分析程序：
| 波长： | 340牛米 |
| 反应杯： | 1 cm光路（玻璃或塑料） |
| 温度： | ~25摄氏度 |
| 最终体积： | 2.62毫升 |
| 样品溶液： | 每比色杯0.2-7.0μg氨 |
| （0.1-2.0 mL样品体积） |
| 用移液管移到试管中 | 空白 | 样品 |
| 蒸馏水（约25°C） 样品 溶液1（缓冲液）溶液2（NADPH） |
2.10毫升 - 0.30毫升 0.20毫升 |
2.00毫升0.10毫升0.30毫升 0.20毫升 |
| 混合*，大约2分钟后读取溶液（A）的吸光度，并通过添加以下物质开始反应：1 | ||
| 悬架3（GlDH） | 0.02毫升 | 0.02毫升 |
| 混合*并在反应结束时（约5分钟）读取溶液（A）的吸光度。如果反应在5分钟后仍未停止，则继续每隔1分钟读取吸光度，直到吸光度保持不变或持续增加2 1分钟**。 |
||
如果样品的“蠕变”率大于空白，则将吸收（样品和空白）推回到悬浮液3的加入时间。
计算：
测定空白和样品的吸光度差（A-A）。从样品吸光度差中减去空白吸收差，从而获得δA。12氨
ΔA的值通常应至少为0.100吸光度单位，以获得足够准确的结果。氨
氨的浓度可计算如下：
| c=V×MW×ΔA氨 εx d x v 哪里： V=最终体积【mL】 MW=氨的分子量[g/mol]ε=340nm处NADPH的消光系数 =6300[l x mol x cm]d=光路[cm]v=样品体积[mL]-1-1 氨气如下： |
[克/升] |
c=2.62 x 17.03 xΔA氨 6300 x 1.0 x 0.10毫米 =0.07082 xΔA氨 |
[克/升] [克/升] |
在分析为制备样品而称重的固体和半固体样品时，含量（g/100 g）根据称重量计算如下：
氨含量
=cammonia[g/L样品溶液]x 100[g/100 g]重量[g/L样品溶液]样品
注：这些计算可以通过使用Megazyme Mega CalcTM来简化，可从Megazyme网站上的产品下载(www.megazyme.com).
B、 自动分析仪分析程序：
笔记：
1. 氨的自动分析仪分析程序可使用单点标准或全校准曲线进行。
2. 对于用于氨测定的每批样品，必须同时使用同一批试剂执行单点标准或校准曲线。
试剂制备如下：
R1的制备：
| 组成部分 | 体积 |
| 蒸馏水溶液1（缓冲）瓶2（NADPH） | 60毫升 12毫升 8毫升（向瓶子2中加入12毫升HO后）2 |
| 总体积 | 80毫升 |
| 组成部分 | 体积 |
| 蒸馏水溶液1（缓冲液）悬浮液3（GlDH） | 6.8毫升0.5毫升 0.7毫升 |
| 总体积 | 8.0毫升 |
| R1级： | 0.200毫升 |
| 样品： | ~0.01毫升 |
| R2级： | 0.025毫升 |
| 反应时间： | 25°C或37°C下约5分钟 |
| 波长： | 340牛米 |
| 配制试剂稳定性： | >冷藏7天 |
| 计算： | 终结点 |
| 反应方向： | 减少 |
| 线性度： | 使用高达62 mg/L的氨 0.01 mL样品体积 |
笔记：
1. 氨的微孔板分析程序可以使用单点标准或全校准曲线进行。
2. 对于用于氨测定的每批样品，必须同时使用同一批试剂执行单点标准或校准曲线。
| 波长： | 340牛米 | ||||
| 微孔板： | 96井（如透明平底、玻璃或塑料） | ||||
| 温度： | ~25摄氏度 | ||||
| 最终体积： | 0.262毫升 | ||||
| 线性度： | 每口井0.1-0.7μg氨 | ||||
| （0.01-0.2 mL样品体积） | |||||
| 用移液管注入井内 | 空白 | 样品 | 标准 | ||
| 蒸馏水样品溶液标准溶液1（缓冲液）溶液2（NADPH） | 0.210毫升 - - 0.030毫升 0.020毫升 |
0.200毫升 0.010毫升 - 0.030毫升 0.020毫升 |
0.200毫升 - 0.010毫升0.030毫升 0.020毫升 |
||
| 混合*，大约2分钟后读取溶液（A）的吸光度，并通过添加以下物质开始反应：1 | |||||
| 悬架3（GlDH） | 0.002毫升 | 0.002毫升 | 0.002毫升 | ||
| 混合*并在反应结束时（约5分钟）读取溶液（A）的吸光度。如果反应在5分钟后仍未停止，则继续每隔1分钟读取吸光度，直到吸光度在1分钟内持续增加**。2 | |||||
**如果样品的“蠕变”率大于空白，则将样品吸光度推回到悬浮液3的加入时间。
计算（微孔板分析程序）：g/L=ΔA x g/L标准x F样品
ΔA标准
如果样品在制备过程中被稀释，则结果必须乘以稀释系数F。
图1。显示K-AMIAR线性的校准曲线。用于产生该校准曲线的反应在37℃下使用10 mm路径长度的反应杯进行5 min。
样品制备（手工格式，A）：
1样品稀释。
反应杯（即0.1 mL待分析样品）中的氨含量应在0.2和7μg之间。因此，样品溶液必须充分稀释，以产生0.01和0.07 g/L之间的氨浓度。
稀释表
| 估计浓度 | 稀释 | 稀释 |
| 氨（g/L） | 有水吗 | 系数（F） |
| < 0.07 | 无需稀释 | 1 |
| 0.07-0.7 | 1 + 9 | 10 |
| 0.7-7.0 | 1 + 99 | 100 |
2样品澄清：
Carrez试剂不能用于脱蛋白，因为它们的使用导致回收率显著降低。使用高氯酸或三氯乙酸作为替代品（见具体示例）。
三。一般考虑。
（a） 液体样品：透明、浅色和近似中性的液体样品可直接用于分析。
（b） 酸性样品：如果使用>0.1 mL的未稀释酸性样品（如葡萄酒或果汁），则可能需要使用2 M NaOH将溶液的pH值增加至约8.0。
（c） 二氧化碳：含有大量二氧化碳的样品应通过使用2 M NaOH将pH值增加至约8.0并轻轻搅拌或使用玻璃棒搅拌来脱气。
（d） 彩色样品：如果需要，对于彩色样品，应进行空白样品，即不含GlDH的样品。
（e） 颜色强烈的样品：如果使用未稀释、颜色强烈的样品，应添加0.2 g聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）/10 mL样品进行处理。用力摇晃试管5分钟，然后用Whatman 1号滤纸过滤。
（f） 固体样品：在蒸馏水中均匀化或粉碎固体样品，必要时过滤。
（g） 含脂肪样品：在高于脂肪熔点的温度下用热水提取此类样品，例如在60°C的100 mL容量瓶中。调整至室温，并用蒸馏水填充容量瓶中至刻度。在冰上或冰箱中保存15-30分钟，然后过滤。丢弃前几毫升滤液，并使用透明上清液（可能有点乳白色）进行分析。
（h） 含有蛋白质的样品：通过加入等量的1 M冰高氯酸并混合，使含有蛋白质的样品脱蛋白。以1500 g离心10分钟，并用1 M KOH中和上清液。或者，使用如下样品制备实例（c）中所述的三氯乙酸。
样品制备示例：
（a） 葡萄汁/葡萄酒中氨的测定。一般来说，白葡萄汁和红葡萄汁/果酱和葡萄酒中的氨浓度可以在不进行任何样品处理的情况下进行测定（过滤除外，必要时根据稀释表进行稀释）。如果要分析体积大于25μL的红酒，可能需要通过添加0.2 g PVPP/10 mL样品去除部分颜色。用力摇晃试管5分钟，然后用Whatman 1号滤纸过滤。通常，不需要稀释，25-50μL的样品体积是令人满意的。
（b） 果汁（如橙汁）中氨的测定。
使用2 M NaOH将25 mL过滤样品的pH值调节至约8.0。将溶液定量转移至50 mL容量瓶中，并用蒸馏水调节至所需体积。如果溶液颜色很深，可能需要添加0.2 g PVPP/10 mL样品以去除部分颜色。用力摇晃试管5分钟，然后用Whatman 1号滤纸过滤。通常，不需要稀释，0.1 mL的样品体积是令人满意的。
（c） 牛奶中氨的测定。
在玻璃试管中，精确混合1毫升牛奶和3毫升牛奶
0.3M三氯乙酸。在室温下培养5分钟以确保蛋白质完全沉淀，然后在室温下离心3分钟（2000 g）。倾析上清液，并使用pH测试条，用10 M KOH中和（高浓度KOH导致体积显著增加）。过滤，直接用清清上清液进行分析。一般情况下，不需要进一步稀释，需要最大2.0 mL的样品体积。
（d） 烘烤产品中氨的测定。
准确称取约10 g代表性材料，放入100 mL溶液中
杜兰瓶。添加20 mL 1 M高氯酸并均化®
使用Ultra turrax或Polytron均质机（或同等设备）2分钟。定量转移至40 mL玻璃烧杯中，并使用2 M KOH将pH调节至约8.0。定量转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水调至刻度（确保含脂层“在”刻度上，水层“在”刻度上）。在冰上储存20分钟以沉淀高氯酸钾，并使脂肪分离。过滤，丢弃前3-5 mL，并使用澄清滤液进行分析。通常，不需要进一步稀释，0.5 mL的样品体积是令人满意的。®®
（e） 肉和肉制品中氨的测定。
准确称取约5 g代表性材料放入100 mL Duran瓶中。添加20 mL 1 M高氯酸并使用Ultra turrax或Polytron均化器（或等效物）均化2分钟。定量转移至40 mL玻璃烧杯中，并使用2 M KOH将pH调节至约8.0。定量转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水调至刻度（确保含脂层“在”刻度上，水层“在”刻度上）。在冰上储存20分钟以沉淀高氯酸钾，并使脂肪分离。过滤，丢弃前3-5 mL，并使用澄清滤液进行分析。通常，不需要进一步稀释，0.5 mL的样品体积是令人满意的。®®®
（f） 甘草制品中氨的测定。使用杵和研钵使约3g样品均匀化，并准确称取约1g代表性材料至100ml容量瓶中。加入60毫升蒸馏水，在70℃下孵育10分钟，或直至完全溶解。使其平衡至室温，并用蒸馏水填充至标记处。过滤并使用略带颜色的滤液进行分析。通常，不需要进一步稀释，0.5 mL的样品体积是令人满意的。
（g） 水中氨的测定（如游泳池水）。
水的氨浓度通常可以不经任何样品处理而测定。一般情况下，不需要稀释，需要2.0 mL的样品体积。
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氨测定试剂盒（快速）
