YIJI 线粒体呼吸链复合物 II 活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
YIJI 线粒体呼吸链复合物 II 活性比色法定量检测 试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
YIJI 线粒体呼吸链复合物 II（琥珀酸－辅酶 Q 还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶
Q 同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测
定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线
粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的琥珀酸－辅酶 Q 还原酶的特异性活性检测。
可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，
即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-Coenzyme Q Reductase；
Succinate Dehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结
合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide；FAD）和三个铁硫中心（Fe-S clusters），以及细
胞色素b亚单位，其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸
（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；
ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜
铬细胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh综合征。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧
化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚
（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH 2 ），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm 波长），由此定量
测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：
Complex II
SUCCINATE + DCPIP + CoQ → FUMARATE + DCPIPH 2 + CoQH 2
蓝色 无色
↑Abs 600 nm ↓Abs 600 nm
产品内容
YIJI 缓冲液（ReagentA） 20 毫升
YIJI 反应液（Reagent B） 2.5 毫升
YIJI 阴性液（Reagent C） 2 毫升
YIJI 底物液（Reagent D） 500 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；YIJI 反应液（Reagent B）和 YIJI 底物液（Reagent D），避免光照，
有效保证 6 月
用户自备
2
比色皿：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
培养箱：用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；YIJI 缓冲液（Reagent A ）室温预
热；YIJI 反应液（Reagent B ）和 YIJI 底物液（Reagent D ）注意避光。然后进行下列操作。
一、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪（温度为 30℃）：波长为 600nm，间隔 60 秒，读数 6 次（共 5 分钟），并置零
二、 背景对照测定
1． 移取 780 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A ）到新的比色皿
2． 加入 100 微升 YIJI 反应液（Reagent B ）
3． 加入 20 微升 YIJI 底物液（Reagent D ）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6． 加入 100 微升 YIJI 阴性液（Reagent C ）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
8． 即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：600 波长读数 0 分钟 －600 波长读数 1 分钟或 5 分钟
三、 样品活性测定
1． 移取 780 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A ）到新的比色皿
2． 加入 100 微升 YIJI 反应液（Reagent B ）
3． 加入 20 微升 YIJI 底物液（Reagent D ）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6． 加入 100 微升待测样品（注意：10 微克总线粒体蛋白 ）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
8． 即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：600 波长读数 0 分钟 －600 波长读数 1 分钟或 5 分钟
四、 计算样品活性
【（样品读数－背景读数）X 1（体系容量；毫升）X 样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X 21.8（毫
摩尔吸光系数 X 1 或 5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克
主要用途
YIJI 线粒体呼吸链复合物 II（琥珀酸－辅酶 Q 还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶
Q 同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测
定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线
粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的琥珀酸－辅酶 Q 还原酶的特异性活性检测。
可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，
即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-Coenzyme Q Reductase；
Succinate Dehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结
合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide；FAD）和三个铁硫中心（Fe-S clusters），以及细
胞色素b亚单位，其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸
（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；
ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜
铬细胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh综合征。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧
化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚
（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH 2 ），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm 波长），由此定量
测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：
Complex II
SUCCINATE + DCPIP + CoQ → FUMARATE + DCPIPH 2 + CoQH 2
蓝色 无色
↑Abs 600 nm ↓Abs 600 nm
产品内容
YIJI 缓冲液（ReagentA） 20 毫升
YIJI 反应液（Reagent B） 2.5 毫升
YIJI 阴性液（Reagent C） 2 毫升
YIJI 底物液（Reagent D） 500 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；YIJI 反应液（Reagent B）和 YIJI 底物液（Reagent D），避免光照，
有效保证 6 月
用户自备
2
比色皿：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
培养箱：用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；YIJI 缓冲液（Reagent A ）室温预
热；YIJI 反应液（Reagent B ）和 YIJI 底物液（Reagent D ）注意避光。然后进行下列操作。
一、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪（温度为 30℃）：波长为 600nm，间隔 60 秒，读数 6 次（共 5 分钟），并置零
二、 背景对照测定
1． 移取 780 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A ）到新的比色皿
2． 加入 100 微升 YIJI 反应液（Reagent B ）
3． 加入 20 微升 YIJI 底物液（Reagent D ）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6． 加入 100 微升 YIJI 阴性液（Reagent C ）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
8． 即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：600 波长读数 0 分钟 －600 波长读数 1 分钟或 5 分钟
三、 样品活性测定
1． 移取 780 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A ）到新的比色皿
2． 加入 100 微升 YIJI 反应液（Reagent B ）
3． 加入 20 微升 YIJI 底物液（Reagent D ）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6． 加入 100 微升待测样品（注意：10 微克总线粒体蛋白 ）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
8． 即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：600 波长读数 0 分钟 －600 波长读数 1 分钟或 5 分钟
四、 计算样品活性
【（样品读数－背景读数）X 1（体系容量；毫升）X 样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X 21.8（毫
摩尔吸光系数 X 1 或 5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克
