植物羽状斑驳病毒（SPFMV）ELISA检测试剂盒 使用说明书

植物羽状斑驳病毒（SPFMV）ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物羽状斑驳病毒（SPFMV）捕获抗体的包被微孔中，依次加入阴性对照、阳性对照、样本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物羽状斑驳病毒（SPFMV）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判断样品是否含有植物羽状斑驳病毒（SPFMV）。
样品收集、处理及保存方法
1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品

• 酶标仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
• 37℃恒温箱

操作注意事项

1.   试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.   预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

名称	96孔配置	48孔配置	备注
微孔酶标板	96孔	48孔	无
阴性对照	0.3mL	0.3mL	无
阳性对照	0.3mL	0.3mL	无
样本稀释液	6mL	3mL	无
检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
底物A	6mL	3mL	无
底物B	6mL	3mL	无
终止液	6mL	3mL	无
封板膜	2张	2张	无
说明书	1份	1份	无
自封袋	1个	1个	无

 
试剂的准备
 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法

1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.   自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

• 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
• 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；
• 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
• 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
• 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
• 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
• 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断
1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；
               阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性
试剂盒性能

• 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
• 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
• 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
• 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
• 有效期：6个月

免责声明

•   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
•   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。