FastBlue蛋白染色液说明书
储存条件
常温贮存,开封后一年有效。如4℃贮存,会有结晶形成,37℃温浴融化后可继续使用。
● 产品简介
FastBlue蛋白染色液是以考马斯亮蓝G-250为主要成分,采用新配方配置而成。可用于SDS-PAGE或非变性PAGE胶(native gel)的快速染色。
特点:方便快捷-不用漂洗,不用加热,不用脱色,不用固定,条带2分钟可见。
灵敏度高-检测下限10ng蛋白
兼容性好-适用于变性和非变性胶以及质谱分析
绿色环保-不含甲醇,冰醋酸
● 用前必读:
1 使用前如发现瓶中有少许沉淀,请混匀后使用。
2以下“使用方法”是针对0.75mm厚度,10×10cm凝胶染色程序。
● 使用方法:
1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,用适量蒸馏水漂洗一下。
2. 弃蒸馏水,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),摇床上常温摇动,根据下表确定染色时间。
待检测蛋白量 |
染色时间 |
>1 μg |
2分钟 |
100ng-1μg |
10分钟 |
10ng-100ng |
60分钟 |
3. 观察记录结果。
● 附:质谱处理程序
1. 切下待检蛋白条带置于1.5ml离心管中。
2. 加入1ml 30%乙醇或30%丙酮(也可用30%醋酸,但会导致蛋白N端酰基化)。
3. 处理30分钟。
4. 重复步骤2,3直到去除所有染料。一般处理2-3次既能完全去除染料。
5. 质谱分析。
● 注意事项:
1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm的凝胶,如果使用更大面积或更厚的凝胶,请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2. 常规染色所需的漂洗,固定,脱色步骤都无必要。
3. 本染色液可以重复利用1-2次,敏感性会有轻微下降,请延长染色时间。
4. 本染色液有轻微腐蚀性,请带手套操作。使用后,请盖好瓶盖,常温密封保存。
● 问题解答:
Q1 FastBlue染胶的最佳温度是多少? |
A1 为达到最佳的染色效果,推荐常温(20-25℃)染色。 |
Q2 FastBlue溶液需要低温贮存吗? |
A2 Fastblue不需要低温贮存,常温贮存(20-25℃)即可。4-8℃贮存,FastBlue会有结晶生产,37℃温浴融化后可继续使用。 |
Q3 FastBlue的染色原理是什么? |
A3 FastBlue染色原理与经典考马斯亮蓝G250染色原理相同(与蛋白质中碱性氨基酸结合),优点是更加快速和更高的灵敏度。 |
Q4 FastBlue染色后,凝胶可以用蒸馏水保存吗? |
A4 可以,蒸馏水保存最为简单,也可以保存在稀释的冰醋酸中。 |
Q5 FastBlue染色后的凝胶能做质谱分析吗? |
A5 可以。请参阅“质谱处理程序” |
Q6 FastBlue染色的凝胶能做Weatern Blot吗? |
A6 不可以。蛋白的染色是不可逆的,染色的凝胶不能用作下游的转膜操作。 |
Q7 Fastblue能重复使用吗? |
A7 FastBlue可以重复使用2-3次,但灵敏度有所下降,可以通过延长染色时间来弥补。 |
Q8 为什么凝胶过夜染色后条带出现涂抹状拖尾? |
A8 FastBlue过夜染色不会对凝胶过度染色。出现抹涂状拖尾原因是上样量太大,因为FastBlue染色灵敏度较高。另外,分子量较小的蛋白在过夜染色中会有扩散现象,我们推荐染色最好在60分钟内完成。 |
Q9 FastBlue有固定凝胶的作用吗? |
A9 FastBlue是水系溶液,没有固定凝胶的作用。然而,由于染色会在60分钟内完成,染色前无需对凝胶进行固定。 |