诺如病毒GI型、GII型RNA核酸检测试剂盒（带IAC，PCR-双色荧光法）使用说明书

诺如病毒GI型、GII型^RNA核酸检测试剂盒（带IAC，PCR-双色荧光法）

◆ 产品说明

诺如病毒GI型、GII型^RNA核酸检测试剂盒（PCR-双色荧光法）参照GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行设计，可于一个反应中同时检测GI型、GII型诺如病毒；适用于贝类生，食蔬菜，胡萝卜、瓜、坚果等硬质表面食品，草莓、西红柿、葡萄等软质水果等食品中GI型、GII型诺如病毒核酸的检测。

◆ 产品组成（96测试）

◆ 适用仪器

   ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列、博日系列以及其它荧光定量PCR 检测仪（可同时检测FAM通道（494 nm）、VIC通道（538nm）两种通道的荧光定量PCR仪）。

◆ 自备耗材和仪器

    ①1.5mL或2.0mL离心管（RNase free）；②0.1mL或0.2mL PCR管或八联管（RNase free）；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头（RNase free）；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴。

◆ 注意事项

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

   1）第一区：试剂准备区。

   2）第二区：样本制备区。

   3）第三区：扩增及产物分析区。

   ★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，使用移液器，试验产生的所有废弃物及时处理。

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

◆ 试剂盒组分及样品处理说明

（1）样品前处理请参照GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行样品前处理。

（2）A-GIGII为GI、GII反应液，含有诺如病毒GIGII型引物探针。

（3）IAC-Nor为过程控制反应液，含有过程控制病毒引物探针。

（4）B-Nor为提取过程控制液，进行样品RNA提取时请参照国标法加入10 μL B-Nor作为提取过程控制；亦可参照国标法另取50-100 μL B-Nor，用PBS缓冲液补足至200 μL，进行核算提取、标准曲线制作及计算提取效率。

（5）NG-Nor为阴性对照，也可参照国标法提取阴性样品核酸作为阴性对照进行实验。

（6）PG-Nor含GI型、GII型诺如病毒核酸，可作为阳性对照，亦可参照国标法作为扩增控制计算抑制指数。

*推荐使用病毒RNA提取试剂盒中的方案进行病毒RNA的提取，或者采用其他等效产品进行RNA提取。

◆ 实验操作（推荐）

1. 反应体系配制：（样本制备区）

参照下表，计算反应液用量，涡旋混匀，离心30s，分装于0.1mL或0.2mLPCR管中，进行模板加入。

配制完成后请盖上PCR管盖，涡旋混匀并离心后上机反应。

*请参照上表对管进行编号，以免混淆。

2. 扩增反应（扩增及产物分析区）

使用荧光定量PCR仪进行检测，编号A～B，H～L使用FAM和VIC通道，编号C～G使用FAM通道。

按下列条件设置扩增反应：

其他仪器请参照仪器说明书进行设置。

◆ 结果判定

1. 实验有效性判定：

（1）实验满足：空白对照阴性（A反应孔)；阴性对照阴性（B反应孔）；阳性对照（J反应孔）阳性；否则本次实验无效，请与本公司技术支持联系。

（2）过程控制（C~G反应孔）需满足：提取效率≥1%；如提取效率＜1%，需重新检测；但如提取效率＜1%，检测结果为阳性，也可酌情判定为阳性。

（3）扩增控制（H~J反应孔）需满足：抑制指数＜2.00；如抑制指数≥2.00，需比较10倍稀释食品样品的抑制指数；如 10 倍稀释食品样品扩增的抑制指数＜2.00，则扩增有效，且需采用10倍稀释食品样品RNA的Ct 值作为结果；10倍稀释食品样品扩增的抑制指数也≥2.00时，扩增可能无效，需要重新检测；但如抑制指数≥2.00，检测结果为阳性，也可酌情判定为阳性。

2. 结果判定

待测样品的Ct值大于等于45时，判定为诺如病毒阴性；待测样品的Ct值小于等于38时，判定为诺如病毒阳性；待测样品的Ct值大于38，小于45时，应重新检测；重新检测结果大于等于45时，判定为诺如病毒阴性；小于等于38时，判定为诺如病毒阳性。