Western Blot实验相关试剂的配制

30%(w/v)丙烯酰胺溶液  

丙烯酰胺             29g

甲叉双丙烯酰胺       1g

加去离子水，定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0，置棕色瓶中贮存于室温或4℃。 

10%SDS 

SDS                    10g

蒸馏水至             100ml

50℃ 水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。

1.5mol/L Tris·HCl （pH8.8）

Tris (MW121.14)      45.43g

超纯水              200ml

溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。

0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）

Tris (MW121.14)      15.14g

超纯水            200ml

溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。

10% 过硫酸胺（AP）

过硫酸胺             0.1g

超纯水               1.0ml

溶解后，4℃避光保存，保存时间为1周。（可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在EP管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可） 

20%Tween20  

Tween20             20ml

蒸馏水至             100ml

混匀后4℃保存。

1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

PMSF                 0.174g

异丙醇                100ml

溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。

单去污剂裂解液（PMSF）

1mol/L Tris·HCl （pH8.0）    2.5ml

NaCl                                0.438g

TritonX-100                           0.5ml

蒸馏水至                                50ml

混匀后4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。

RIPA裂解配方

50 mM Tris-HCl pH 7.4

150 mM NaCl

1 mM PMSF （用前加）

1 mM EDTA

1% Triton x-100

1% 脱氧胆酸钠

0.1% SDS

G250 考马斯亮蓝溶液 （蛋白定量专用）

考马斯亮蓝G250      100mg

95%乙醇             50ml

磷酸                      100ml

蒸馏水至              1000ml

配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。

100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）

BSA                           0.1g

0.15 mol/L NaCl                   1ml

溶解后-20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，-20℃保存。

还原型 5XSDS 上样缓冲液  

0.5 mol/L Tris·HCl （pH6.8）    2.5ml

二硫叔糖醇（DTT，MW154.5）      0.39g

SDS                             0.5g

溴酚蓝                          0.025g

甘油                            2.5ml

混匀后，分装于 1.5ml 离心管中，4℃保存。

电泳液缓冲液    

Tris （MW121.14）          3.03g

甘氨酸（MW75.07）        18.77g

SDS                            1g

蒸馏水至                     1000ml

溶解后室温保存，次溶液可重复使用 3～5 次。

（电泳液可以回收重复利用，一般将回收的电泳液加入垂直电泳槽的下半部分，上半部分最好使用新鲜的电泳缓冲液）

（可以配制成 10×电泳缓冲液进行保存，稀释 10 倍使用）

转移缓冲液    

半干

24mmol/L Tris （MW：121.14）     1.4536 g

192mmol/L  甘氨酸（MW：75.07） 7.20672 g

20 ％甲醇                        100 ml

蒸馏水至                         500ml

浸渍（湿转）

48mmol/L Tris             2.375g

39mmol/L 甘氨酸           11.25g

20 ％甲醇                  200ml

0.0375％SDS            0.375g

蒸馏水至                  1000 ml

溶解后室温保存，次溶液可重复使用 3～5 次（次溶液最好保存在 4 度冰箱，最多使用 5 次左右，不然影响转移效率）。（先用蒸馏水溶解甘氨酸、Tris 和 SDS，然后再加入甲醇，最后补足液体。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸、Tris 和 SDS 等比较困难）

（可以配制成 2×转移缓冲液进行保存，稀释后使用）

10X 丽春红染液  

丽春红 S         2g

三氯乙酸        30g

磺基水杨酸      30g

蒸馏水至         100ml

TBS 缓冲液 

1 mol/L Tris·HCl （pH7.5） 10ml

NaCl                        8.8g

蒸馏水至                    1000ml

（可以配制成 10×TBS 缓冲液进行保存，稀释 10 倍使用）

TBST 缓冲液       

20 ％Tween20        1.65ml

TBS                700ml

混匀后即可使用，最好现用现配。

封闭液       

脱脂奶粉（国产）             5g 

TBST                         100ml

最好现用现配。

洗脱抗体缓冲液  

14.4 mol/L β-巯基乙醇                  700μl（通风厨里加）

SDS                                                  2g

0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）                   12.5ml

超纯水至                                           100ml

配制时，在通风厨内进行。4℃保存。可重复使用 1 次。（可用可不用）