大肠杆菌中的蛋白在IPTG诱导下的表达操作步骤

蛋白的重组表达是指将外源基因克隆在含有特定启动子的表达载体中，让其在大肠杆菌中在IPTG的诱导下过量表达。

蛋白质纯化的第一步是在细胞宿主中表达蛋白质。制备的pET28-His6-GFP含有iptg诱导的His6-GFP。一旦细胞开始生长，将通过添加IPTG“诱导”它们制造蛋白质。然后将让它们继续生长并生产蛋白质几个小时，然后通过离心收集细胞。

材料

1mL过夜培养的由pET28-His6-GFP转化的BL21细胞

1000X 卡那霉素原液

100M IPTG储备液

50mL液体LB培养基

步骤

1. 在50mL LB中加入1000X卡那霉素，使最终浓度为1X。搅拌均匀。

2. 将过夜培养液1:100稀释到50mL LB中，并加入1X卡那霉素。在37°C摇晃培养。定期取1mL样品检查OD600(测量细菌浓度)。

3. 当OD600达到0.6-1.0(大约2小时)时，将IPTG加入，最终浓度为500µM。这将诱导His6-GFP蛋白的表达。

4. 将培养液在37°C摇晃16-24小时，使其生长并表达GFP。请注意，在某些情况下，诱导后降低温度可能有助于蛋白质折叠。

5. 16-24小时后，将培养液倒入50mL锥形管中。

6. 将颗粒细胞在离心机中以4000g旋转10分钟。记得要平衡离心机!

7. 将上清液倒入废液容器中(靠近水槽)。我们将漂白介质，以确保介质中残留的细菌在排入下水道之前被杀死。

8. 冷冻细胞颗粒，直到准备好开始蛋白质纯化。