2×CTAB提取缓冲液说明书

2×CTAB提取缓冲液

● 产品编号及规格：

● 产品介绍：

    CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

    2×CTAB提取缓冲液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，0.2%(v/v) 还原剂(随用随加) 。

● 储存条件：

   室温贮存一年。加入还原剂后4℃贮存。

● 实验操作步骤：

1. 2×即用型CTAB提取液配制：

按照终浓度0.2% （v/v）加入还原剂，如100ml 2×CTAB提取缓冲液中加入0.2 ml 还原剂。加入还原剂后的2×即用型CTAB提取液4℃贮存。

2. 取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。

3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中，立即加入0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。

4. 加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm 离心10分钟。

5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中，加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm离心10分钟。

6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入0.6倍体积的冰冷异丙醇，轻柔混匀，冰浴30分钟。

7. 12000 rpm4℃ 离心10分钟。

8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀，4℃12000 rpm 3分钟，吸弃乙醇。

9.4℃ 12000 rpm 1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。

注：沉淀不能彻底干燥，否则不好溶解。

10. 加入30-50μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA，-20℃保存备用。