Olink应用:基于泼尼松联合mTOR抑制剂西罗莫司治疗腹膜后纤维化研究
影响因子：27.973
技术：Olink target 96-plex inflammatory panel（由上海伯豪生物提供技术服务），流式细胞术，电子计算机断层扫描（CT），免疫组化技术
腹膜后纤维化（RPF）是一种罕见的自身免疫性疾病，在腹膜后有纤维组织生长并伴随炎症反应发生。目前常见的治疗方法是长期服用糖皮质激素（如泼尼松）来控制炎症，然而，副作用很常见，但减少剂量后又会导致疾病频繁复发。因此，寻找更安全、副作用更小的药物便极为重要。
本研究作者通过基因-疾病-药物数据库，发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是 RPF 中的关键信号蛋白，而mTOR 抑制剂西罗莫司影响许多RPF 通路，由此设计了一种临床疗法，将逐渐减少剂量的泼尼松与长期稳定剂量的mTOR 抑制剂西罗莫司相结合。而后作者实施了一项单臂临床试验，评估了 8名 RPF 患者在第 0、12 和 48 周时的治疗效果。通过CT监测纤维组织大小，生化实验室检测炎症和肾功能的标志物以用于评估药物副作用，流式细胞仪检测免疫细胞类型和丰度， Olink蛋白质组学检测血浆炎症蛋白的丰度。
结果显示，联合治疗后，患者纤维化组织缩小一半左右，急性炎症标志物减少70%，大部分肾功能异常患者恢复正常。在分子方面，包括TH2，TH17和cTFH细胞在内的纤维化相关T细胞亚群减少，肿瘤坏死因子和相关细胞因子恢复到健康水平，并且没有观察到严重的长期副作用。
因此，作者认为此联合疗法能够显著缓解纤维化，并且可使免疫系统向健康状态整体回归，同时实现良好的耐受性。或许在未来，这种新疗法有可能取代类固醇单一疗法来治疗RPF。
1. mTOR 途径在 RPF 中被高度激活
作者在搜索基因-疾病-药物数据库后，鉴定到了一些富含细胞毒性/激酶途径和细胞因子/趋化因子途径的基因（调整后的 p<0.05），对所有基因的汇总分析后，揭示了关键信号通路，包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 通路及其相关的phosphoinositide-3-kinase (PI3K)- Akt 通路。为了验证此发现，作者利用mTOR 及其两个直接下游信号分子，mTOR-complex 1 中的phospho-S6K (p-S6K) 和 mTOR-complex 2 中的phospho-AKT (p-Akt)进行免疫组化染色：以纤维化最密集并伴有T细胞和B细胞高度浸润的纤维组织中心(GCs)，以及靠近GCs的外周组织作为实验组，以非纤维化组织作为对照。结果显示在GCs或外周观察到>90% 的细胞被mTOR染色。p-S6K在对照组中染色程度较低，在GCs中染色程度较高；相比之下，p-Akt 在对照组和实验组中的结果不明显。因此，得出结论，mTOR-complex 1 在纤维化组织中被高度激活。
图1 PI3K-AKT- mTOR通路在RPF组织中高度激活
2. RPF症状通过联合治疗得到改善
通过联合治疗，大多数RPF症状显示出改善。CT扫描显示，在12周和48周的治疗中，纤维化组织的轴向直径和厚度都缩小了近一半。两个急性炎症的标志物，CRP和ESR，减少了70%-80%。肾脏功能的两个标志物，Scr和eGFR，在治疗过程中也显示出持续的改善。联合治疗还缓解了RPF患者的贫血症状，血红蛋白浓度提高了约12%。研究还发现，治疗后IgG4下降了40%-50%，这表明它对治疗IgG4+RPF 也有效。基于此现象作者还分析了免疫球蛋白的其他类型，发现除IgG在治疗过程中明显减少外，IgE、IgM和IgA并没有显示出明显的变化。
图2 实验测试评估强的松和西罗莫司联合治疗RPF的治疗效果
3. 免疫细胞类型和丰度情况
作者通过流式细胞术对外周血中的七个T细胞亚群进行了全面的免疫表型分析。在治疗过程中，观察到TH2，TH17 和cTFH 细胞丰度减少，但 TH1 未见变化。TH2，TH17细胞分别是产生 IL-4 和产生 IL-17 的 CD4+T 细胞，并且cTFH 细胞在GCs的发育和抗体生产中发挥重要作用。
图3 流式细胞术免疫谱分析显示，特异性T细胞亚群受治疗调节
4. 利用olink技术检测治疗过程中的炎症蛋白的丰度
作者使用96-plex inflammatory panel进行静脉血中蛋白进行检测，共鉴定了 75 种蛋白。25 种蛋白质显示出相对于对照组的疾病状态变化，包括肿瘤坏死因子 (TNF)、白细胞介素和趋化因子（t 检验，调整后的 p<0.05）。治疗后，其中 6 种恢复到健康水平，即 CCL23 、OSM 、TNF 、TNFRSF9 、TRAIL 和VEGFA。值得注意的是，RPF 中大多数处于健康水平的蛋白质在治疗结束时仍保持稳定（t 检验，调整后的 p<0.05）。也有少部分蛋白质，例如AXIN1、CCL20、CXCL1、CXCL5、FGF-2和SIRT2在疾病状态下表现正常，但在治疗后偏离正常，这些变化有可能归因于药物副作用（75 人中有 6 人，8%）。作者对25种对治疗有反应的炎症蛋白进行了 KEGG 通路富集，发现它们大多富集在细胞因子、趋化因子和其他免疫相关信号通路中（图 4B).
图4 Olink Target 96炎症panel进行细胞因子分析
基于以上研究，将逐渐减少剂量的泼尼松与长期稳定剂量的mTOR 抑制剂西罗莫司相结合的治疗策略被证明可有效治疗腹膜后纤维化（RPF）。由于目前单一长期类固醇激素的 RPF 治疗通常会导致严重的副作用，这一新疗法有可能取代类固醇单一疗法，为新的治疗方向带来希望。
参考文献：
Gao H, Liu S, Mai Y, Wang Y, Zhang X, Zheng S, Luo C, Pan C. Combined therapy of prednisone and mTOR inhibitor sirolimus for treating retroperitoneal fibrosis. Ann Rheum Dis. 2023 Jan 31:ard-2022-223736. doi: 10.1136/ard-2022-223736. Epub ahead of print. PMID: 36720581.
