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PCR反应DNA复制酶系作用顺序

浏览次数:260 发布日期:2022-2-15  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
​聚合酶链反应简称PCR,是以DNA半保留复制机制为基础,DNA复制时,以亲代DNA的两条链分别作为模板,在DNA聚合酶的催化下,按碱基互补的原则合成两条与模板链互补的新链,组成新的DNA分子,新形成的两个子代DNA与亲代DNA的碱基顺序完全一样​。由于子代DNA分子中一条链来自亲代,而另一条链是新合成的,因此这种复制方式称为半保留复制(semi-conservative replication)。
DNA复制酶系作用顺序:
1. 拓扑异构酶
使DNA超螺旋结构解开,形成其基本的双螺旋结构。

2. 解链酶
使DNA双螺旋结构解开,碱基间氢键断裂,形成两条单链DNA,构成”复制叉“。

3. 单链DNA结合蛋白
单链DNA结合蛋白结合在两条单链DNA上,稳定单链DNA,阻止DNA复性,避免被核酸酶降解,便于复制子代DNA 。

4. 引物酶
是一种依赖DNA的RNA聚合酶,该酶以DNA为模板,聚合一段RNA短链引物,以提供自由的3'-OH,形成引发体,使子代DNA链能够开始聚合。

5. DNA聚合酶
由于DNA聚合酶只能以5'→3'方向聚合子代DNA链,即模板DNA链的方向必须为3'→5'。因此,分别以两条亲代DNA链作为模板聚合子代DNA链时的方式是不同的。

以3'→5'方向的亲代DNA链作模板的子链,在复制时连续合成,子链的聚合方向为5'→3',这一条新合成的子链被称为前导链(leading strand)。以5'→3'方向的亲代DNA链为模板,合成子链的过程不连续,这条链被称为随从链(lagging strand)或滞后链。

DNA双链在复制时逐步解开,因此随从链的合成是一段一段的。DNA在复制时,由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段 (Okazaki fragment)。

6. DNA连接酶
在DNA连接酶的催化下,形成最后一个磷酸酯键,将冈崎片段连接起来,形成完整的DNA长链。
来源:上海博湖生物科技有限公司
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